Birbaşa RT-qPCR Kit II
Kit təsviri:
◮Unikal reaksiya tamponu ilə Foregene tərəfindən hazırlanmış Foreasy Reverse Transkriptaza və Foreasy HS Taq DNT Polimerazdan istifadə edən Direct RT-qPCR Kit bu dəsti güclü müqavimət və uyğunluqla hazırlayır və Foregene Lysis sistemindən şablon kimi reaksiya istifadəsini birbaşa sınaqdan keçirə bilər.Bu dəst COVID-19 nuklein turşusu aşkarlama dəsti və digər patogen bakteriyaların nuklein turşusu aşkarlama dəstinin hazırlanması üçün tətbiq oluna bilər.
Təsvir
Birbaşa RT-qPCR Kit ayrıca qablaşdırılmış RT-qPCR buferini, yüksək effektiv Foreasy HS Taq DNT Polimerazını təmin edir.və Foreasy Reverse Transkriptaza (MMLV),sadə yoxlama çərçivəsində arxa uç dəstlərinin yaradılması və sistem tənzimlənməsi üçün əlverişli edir.
Unikal reaksiya tamponu ilə Foregene tərəfindən hazırlanmış Foreasy Reverse Transkriptaza və Foreasy HS Taq DNT Polimerazdan istifadə edən Direct RT-qPCR Kit bu dəsti güclü müqavimət və uyğunluqla hazırlayır və Foregene Lysis sistemindən şablon kimi reaksiya istifadəsini birbaşa sınaqdan keçirə bilər.Bu dəst COVID-19 nuklein turşusu aşkarlama dəsti və digər patogen bakteriyaların nuklein turşusu aşkarlama dəstinin hazırlanması üçün tətbiq oluna bilər.
Bu dəst asanlıqla və sürətli istifadə edərək birbaşa IVD məhsulunun komponenti ola bilər.Yenidən inkişaf etmədən yalnız asan yoxlama tələb olunur.
Spesifikasiyalar
500T, 50.000T
Kit komponentləri
| Kit məzmunu (20 μL reaksiya sistemi) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Öncədən Rəks transkriptaza (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNT Polimeraz (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2 × Birbaşa RT-qPCRBufer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Təlimat | 1 | 1 |
Əməliyyat addımları
A: Şablon və reagent hazırlayın
1. Hazırlanmış RNT şablonunu (RNT şablonunu çıxarmaq və təmizləmək üçün Foregene Total RNT Isolation Kit seriyasından istifadə etmək tövsiyə olunur) və ya nümunə krekinq məhsulunu (Foregene Lysis sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur), spesifik primerləri (10 μM) və digər müvafiq istehlak materiallarını, aləti hazırlayın.
2. 2× Direct RT-qPCR Buferi, RNase-Free ddH2O və 20× ROX Referans Boyasını (lazım olduqda) buzla qutuya qoyun, təbii əriməsin və yumşaq bir şəkildə qarışdırın.
B: RT-qPCR sisteminin hazırlanması
Reaksiya sisteminin reaksiya tamponunun həcminin yarısını alın (məsələn, sistemin həcmi 20 μL olarsa, 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buferi almalıdır.). üçünfermentin müvafiq miqdarı, bunu təklif edirikM-MLV:10-30 U/20 μL reaksiya sistemi,TaqDNT polimeraza:1-2 U/20 μL reaksiya sistemibu bizim təklifimizdir, siz onu sınamalı və tənzimləməlisiniz), RNT şablonu, xüsusi primerlər və zondlar əlavə edin və RNase-Free ddH əlavə edin2O - 20 μL.RT-qPCR reaksiya sisteminin xüsusi hazırlanması aşağıdakı cədvəl 1-ə istinad edilə bilər.
Cədvəl 1: RT-qPCR sisteminin hazırlanması
| Komponent | Həcmi | Son konsentrasiya |
| 2 × Birbaşa RT-qPCR Bufer | 10 μL | 1× |
| Qarşıdan gələn tərs transkriptaza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNT Polimeraz | 1-2 U | |
| İrəli Astar (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Əks Astar (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Zond (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Şablon (RNT və ya Lizat) | X μL | |
| 20× ROX İstinad Boyası | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Ümumi Həcmi | 20 μL |
Qeyd: Forward Primer və Reverse Primer hədəf genin spesifik primerləridir.qPCR sistemi praktiki eksperimental və PCR modellərinə uyğun olaraq tənzimlənə bilər.Əksər primerlərin son konsentrasiyası üçün 400nM tövsiyə edirik.Hazırlanmış konsentrasiyaya və tövsiyə olunan son konsentrasiyaya uyğun olaraq xüsusi primerlərin və zondların həcmini tənzimləyin.
1*: Müxtəlif kəmiyyət PCR alətlərinə uyğun olaraq ROX Referans Boyasının uyğun yekun konsentrasiyasını seçin.Ümumi kəmiyyət PCR alətlərinin optimal ROX Referans Boya konsentrasiyası aşağıdakı cədvəldə göstərilmişdir:
| Kəmiyyət PCR alətləri | ROX Referans Boyasının son konsentrasiyası |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Birinci addım,və s. | 1× (məsələn, 20 μL reaksiya sisteminə 1μl 20×ROX Referans Boya əlavə edin) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P və Mx4000 və s. | 0,5× (məsələn, 20 μL reaksiya sisteminə 0,5μl 20×ROX Referans Boya əlavə edin) |
| Roche PCR aləti, Bio-Rad PCR aləti, Eppendorf kəmiyyət PCR aləti və s. | ROX İstinad Boyası olmadan |
Saxlama və Raf ömrü
Kit -20 ± 5 ℃ temperaturda saxlanmalıdır.Dərhal -20°C termostatik soyuducuda saxlanmalıdır.Uyğun vəziyyətdə saxlandıqda etibarlılıq müddəti 2 ildir.
