Heyvan Toxumaları və Hüceyrələri üçün Ümumi RNT İzolyasiya Kiti Total RNT Ekstraksiya və Təmizləmə Kitləri
Kit təsviri:
Müxtəlif heyvan toxumalarından yüksək təmizlik və yüksək keyfiyyətli ümumi RNT-ni tez və səmərəli şəkildə çıxarın.
RNT deqradasiyasından narahat olmaq lazım deyil.Bütün sistem RNase-sizdir
DNT Təmizləmə Sütunundan istifadə edərək DNT-ni effektiv şəkildə çıxarın
DNaz əlavə etmədən DNT-ni çıxarın
Sadə - bütün əməliyyatlar otaq temperaturunda tamamlanır
Sürətli - əməliyyat 30 dəqiqə ərzində tamamlana bilər
Təhlükəsiz - heç bir üzvi reagent istifadə edilmir
Yüksək təmizlik - OD260/280≈1,8-2,1
Kitlərin təsviri
50 hazırlıq, 200 hazırlıq
Bu dəst istifadə edirspin sütunu və düsturmüxtəlif heyvan toxumalarından yüksək effektivliklə yüksək saflıqda və yüksək keyfiyyətli ümumi RNT çıxara bilən şirkətimiz tərəfindən hazırlanmışdır. Bu, genomik DNT-ni supernatantdan və toxuma lizatından asanlıqla ayırıb adsorbsiya edə bilən, sadə və vaxta qənaət edən səmərəli DNT Təmizləmə Sütunu təmin edir;Yalnız RNT sütunu RNT-ni effektiv şəkildə bağlaya bilər və unikal formula ilə eyni vaxtda emal edilə bilər. Çoxlu nümunələr.
Bütün sistem RNazsızdır, belə ki, çıxarılan RNT pozulmur;Bufer RW1, Bufer RW2 tampon yuma sistemi, beləliklə əldə edilən RNT protein, DNT, ion və üzvi birləşmələrin çirklənməsindən azaddır.
Kit komponentləri
| Heyvanların Ümumi RNT İzolyasiya Kiti | ||
| Kit komponentləri | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Bufer RL1* | 25ml | 100ml |
| Bufer RL2 | 15ml | 60ml |
| Bufer RW1* | 25ml | 100ml |
| Bufer RW2 | 24ml | 96ml |
| RNazsız ddH2O | 10ml | 40ml |
| Yalnız RNT Sütun | 50 | 200 |
| DNT Təmizləmə Sütunu | 50 | 200 |
| Təlimat | 1 ədəd | 1 ədəd |
Məhsul haqqında məlumat
| Format | Döndürmə sütunu | Təmizləmə komponenti | Foregene sütunu, reagent |
| Flux | 1-24 nümunə | Hazırlıq üçün vaxt | ~30 dəq (24 nümunə) |
| sentrifuqa | Masa üstü sentrifuqa | Piroliz ayrılması | Mərkəzdənqaçma ayırma |
| Nümunə | Heyvan toxuması;hüceyrə | Nümunələrin miqdarı | Toxuma: 10-20 mq;Hüceyrə:(1-5)×106 |
| Elüsyonun həcmi | 50-200 mkL | Maksimum yükləmə həcmi | 850 μL |
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
■ RNT deqradasiyası ilə bağlı narahat olmağa ehtiyac yoxdur;bütün sistem RNase-sizdir
■ DNT-dən istifadə edərək DNT Təmizləmə Sütununu effektiv şəkildə çıxarın
■ DNaz əlavə etmədən DNT-ni çıxarın
■ Sadə-bütün əməliyyatlar otaq temperaturunda tamamlanır
■ Sürətli əməliyyat 30 dəqiqə ərzində tamamlana bilər
■ Təhlükəsiz-üzvi reagent tələb olunmur
■ Yüksək təmizlik -OD260/280≈1,8-2,1
Kit tətbiqi
Müxtəlif təzə və ya dondurulmuş heyvan toxumalarından və ya mədəni hüceyrələrdən ümumi RNT-nin çıxarılması və təmizlənməsi üçün uyğundur.
Məhsul parametrləri
■ Aşağı axın tətbiqləri: birinci zəncir cDNT sintezi, RT-PCR, molekulyar klonlaşdırma, Northern Blot və s.
■ Nümunələr: heyvan toxumaları, mədəni hüceyrələr
■ Dozaj: Dokular 10-20mg, Hüceyrə (2-5)×106
■ Təmizləmə sütununun maksimum DNT bağlama qabiliyyəti: 80 μg
■ Elüsyonun həcmi: 50-200 μl
Diaqram
Heyvanların Ümumi RNT İzolyasiya Kiti 20 mq müalicə olunur
Təzə siçan nümunələri, 5% təmizlənmiş ümumi RNT 1% agar götürün
Glikogel elektroforezi
1: Dalaq 2: Böyrək
3: Qaraciyər 4: Ürək
Saxlama və raf ömrü
Kit otaq temperaturunda (15-25 ℃) və ya daha uzun müddət üçün 2-8 ℃ temperaturda 24 ay saxlanıla bilər.RL1 tamponu β-merkaptoetanol (isteğe bağlı) əlavə edildikdən sonra 1 ay müddətində 4 ℃ temperaturda saxlanıla bilər.
İstinad edilən məqalələr
1.ƏG: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Mərkəzi Kompozit Dizaynın Optimizasiyası Vasitəsilə Qaraciyər Bazasının Redaktəsi üçün mRNA Yüklü Lipid Bənzər Nanohissəciklər.Adv.Funksiya.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.ƏG: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.Terapevtik kök hüceyrə hazırlığında hüceyrələrin kortəbii apoptozu fosfatidilserinin sərbəst buraxılması ilə immunomodulyator təsir göstərir.Signal Transduct Target Ther.2021 iyul 14;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.ƏGƏR: 17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.N7-Methylguanosine tRNA modifikasiyası onkogen mRNT tərcüməsini gücləndirir və intrahepatik xolangiokarsinoma inkişafını təşviq edir.Mol hüceyrəsi.29 iyul 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.ƏG: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Mettl14-Vasitəli m6A Modifikasiyası Endoplazmik Retikulum Homeostazını Saxlamaqla Qaraciyərin Regenerasiyasını Asanlaşdırır.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
üçün RNT təcrid dəstləri digər nümunə mənbələrimövcuddur:
Hüceyrə, bitki, virus, qan və s.
RNT çıxarılmır və ya RNT məhsuldarlığı aşağıdır
Tez-tez bərpa səmərəliliyinə təsir edən müxtəlif amillər var, məsələn: toxuma nümunəsinin RNT tərkibi, əməliyyat üsulu, elüsyonun həcmi və s.
1. Əməliyyat zamanı buz vannası və ya kriogenik (4 °C) sentrifuqalama aparıldı.
Tövsiyə: Bütün proses boyu otaq temperaturunda (15-25°C) işləyin, aşağı temperaturda buz vannası və sentrifuqa etməyin.
2. Nümunənin düzgün saxlanmaması və ya nümunənin həddindən artıq saxlanması.
Tövsiyə: Nümunələri -80 °C-də saxlayın və ya maye azotda dondurun və təkrar dondurma-ərimə istifadəsindən çəkinin;RNT çıxarılması üçün təzə toxuma və ya mədəni hüceyrələrdən istifadə etməyə çalışın.
3. Qeyri-kafi nümunə lizisi.
Tövsiyə: Toxumanı homogenləşdirərkən, toxumanın kifayət qədər homojenləşdiyinə və RNT-nin sərbəst buraxılmasını izah etmək üçün toxuma hüceyrələrinin kifayət qədər bölünməsinə əmin olun.
4. Eluent düzgün əlavə olunmayıb.
Tövsiyə: RNase-Free ddH olduğunu təsdiq edin2O, təmizləyici sütun membranının ortasına damcı-damcı əlavə edilir.
5. Bufer RL2 və ya RW2 tamponuna mütləq etanolun düzgün həcmi əlavə edilməmişdir.
Tövsiyə: Təlimatlara əməl edin, RL2 tamponuna və RW2 tamponuna düzgün həcmdə mütləq etanol əlavə edin və dəsti istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.
6. Toxuma nümunəsinin dozası uyğun deyil.
Tövsiyə: 10-20 mq toxuma və ya (1-5) × 10 istifadə edin6Həddindən artıq toxuma istifadəsi RNT ekstraksiyasının azalması ilə nəticələnə biləcəyi üçün 500 μl bufer RL1 üçün hüceyrələr.
7. Düzgün olmayan elüsyon həcmi və ya natamam elüsyon.
Tövsiyə: Təmizləmə sütununun elüsyon həcmi 50-200 μl-dir;elüsyon effekti qənaətbəxş deyilsə, əvvəlcədən qızdırılmış RNase-Free ddH əlavə etdikdən sonra otaq temperaturunda yerləşdirmə müddətini uzatmaq tövsiyə olunur.2O, məsələn, 5-10 dəqiqə.
8.Təmizləmə sütununda Bufer RW2 yuyulmasından sonra etanol qalığı var.
Tövsiyə: Bufer RW2 yuyulduqdan sonra etanol qalığı varsa, 1 dəqiqə boş borunun sentrifuqalanması, boş borunun sentrifuqa əməliyyatı üçün vaxt 2 dəqiqəyə qədər artırıla bilər və ya qalıq etanolu adekvat şəkildə çıxarmaq üçün təmizləyici sütun otaq temperaturunda 5 dəqiqəyə yerləşdirilə bilər.
Təmizlənmiş RNT pozulur
Təmizlənmiş RNT-nin keyfiyyəti nümunənin qorunması, RNaz çirklənməsi və manipulyasiya və s. kimi amillərlə bağlıdır.
1. Toxuma nümunələri vaxtında saxlanılmır.
Tövsiyə: Əgər toxuma nümunələri və ya hüceyrələr toplandıqdan sonra vaxtında istifadə olunmazsa, dərhal -80 °C-də və ya maye azotda dondurulmuş konservləşdirin.RNT çıxarmaq üçün mümkün olduqda yeni alınmış toxuma və ya hüceyrə nümunəsindən istifadə edin.
2. Toxuma nümunələrinin təkrar dondurularaq əriməsi.
Tövsiyə: Toxuma nümunələrini saxlayarkən, konservasiya üçün onları kiçik parçalara ayırmaq və nümunənin təkrar dondurularaq əriməsinin və RNT-nin deqradasiyasının qarşısını almaq üçün onlardan istifadə edərkən onlardan birini çıxarmaq yaxşıdır.
3. RNase tətbiq edilir və ya əməliyyat zamanı birdəfəlik əlcəklər, maskalar və s.
Tövsiyə: RNT çıxarılması təcrübələri ən yaxşı ayrı RNT manipulyasiya otaqlarında aparılır və təcrübədən əvvəl cədvəl təmizlənir.
Təcrübə zamanı RNaz-ın tətbiqi nəticəsində yaranan RNT deqradasiyasını minimuma endirmək üçün birdəfəlik əlcəklər və maskalar taxın.
4. İstifadə zamanı reagentlər RNaz ilə çirklənir.
Tövsiyə: Müvafiq təcrübələr üçün yeni Heyvan Total RNT İzolyasiya Kiti ilə əvəz edin.
5. RNT manipulyasiyasında istifadə olunan sentrifuqa boruları, ucları və s. RNaz ilə çirklənmişdir.
Tövsiyə: RNT ekstraksiyasında istifadə olunan sentrifuqa borularının, ucların, pipetlərin və s.-nin hamısının RNazsız olduğunu təsdiq edin.
Təmizlənmiş RNT aşağı axın təcrübələrinə təsir göstərir
Təmizləmə sütunu ilə təmizlənmiş RNT, əgər duz ionları çox böyükdürsə, protein tərkibi aşağı axın təcrübəsinə təsir edəcək, məsələn: əks transkripsiya,Northern Blot et al.
1. Elüsyonlu RNT-də duz ionu qalıqları var.
Tövsiyə: RW2 tamponuna etanolun düzgün həcminin əlavə olunduğunu təsdiqləyin və əməliyyat üçün göstərilən mərkəzdənqaçma sürətində 2 təmizləyici sütunu yuyun;duz ionu qalığı varsa, təmizləyici sütunu otaq temperaturunda 5 dəqiqə Bufer RW2-də buraxın və duzun çirklənməsini maksimum dərəcədə aradan qaldırmaq üçün sentrifuqa edin.
2. Elyusiya edilmiş RNT-də etanol qalığı.
Tövsiyə: RW2 tamponunun yuyulmasından sonra boş borunun sentrifuqalama əməliyyatını əməliyyat üçün göstərilən santrifüqalama sürətində yerinə yetirdiyini təsdiqləyin, əgər hələ də etanol qalığı varsa, boş borunun sentrifuqa əməliyyatının vaxtını 2 dəqiqəyə qədər artırın və ya boş borunun yenidən sentrifuqanın çıxarılmasından sonra onu otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.
