Polisaxaridlər və Polifenollarla Zəngin Bitkilər üçün Ümumi RNT İzolyasiya Kiti Plus Total RNT Təmizləmə Kiti
Kit təsviri:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Tərkibində yüksək polisaxarid və polifenol komponentləri olan ümumi bitki nümunələrindən ümumi RNT-nin təmizlənməsi üçün.
Tərkibində polisaxaridlərin və polifenolların yüksək olduğu bitki nümunələrindən yüksək keyfiyyətli ümumi RNT-ni sürətlə çıxarın.
DNT Təmizləmə Sütunundan istifadə edərək RNazsız
Sadə - bütün əməliyyatlar otaq temperaturunda tamamlanır
Sürətli - əməliyyat 30 dəqiqə ərzində tamamlana bilər
Təhlükəsiz - heç bir üzvi reagent istifadə edilmir 
Spesifikasiyalar
50 hazırlıq, 200 hazırlıq
Dəst Foregene tərəfindən hazırlanmış spin sütunu və formulasından istifadə edir ki, bu da yüksək polisaxarid və ya polifenol tərkibli müxtəlif bitki toxumalarından yüksək təmizlik və yüksək keyfiyyətli ümumi RNT-ni səmərəli şəkildə çıxara bilir.O, genomik DNT-ni supernatantdan və toxuma lizatından asanlıqla çıxara bilən DNT Təmizləmə sütununu təmin edir.Yalnız RNT sütunu RNT-ni effektiv şəkildə bağlaya bilər.Kit eyni zamanda çoxlu sayda nümunəni emal edə bilər.
Bütün sistemdə RNaz yoxdur, ona görə də təmizlənmiş RNT pozulmayacaq.Bufer PRW1 və Bufer PRW2 əldə edilən RNT-nin zülal, DNT, ionlar və üzvi birləşmələrlə çirklənməməsini təmin edə bilər.
Kit komponentləri
| Bufer PSL1, Bufer PS, Bufer PSL2 |
| Bufer PRW1, Bufer PRW2 |
| RNazsız ddH2O, DNT Təmizləmə Sütunu |
| Yalnız RNT Sütun |
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
■ Bütün proses boyu otaq temperaturunda (15-25 ℃) işləmə, buz vannası və aşağı temperaturda sentrifuqasiya olmadan.
■ Tam dəst RNase-Free, RNT deqradasiyası barədə narahat olmağa ehtiyac yoxdur.
■ Xüsusilə polisaxaridlərin və polifenolların bitki nümunələrindən RNT-nin təmizlənməsi üçün uyğundur.
■ DNT Təmizləmə Sütunu xüsusi olaraq DNT-yə bağlanır, beləliklə dəst DNaz əlavə etmədən genomik DNT çirklənməsini aradan qaldıra bilər.
■ Yüksək RNT məhsuldarlığı: yalnız RNT sütunu və unikal formula RNT-ni effektiv şəkildə təmizləyə bilər.
■ Sürətli sürət: işləmək asandır və 30 dəqiqə ərzində tamamlana bilər.
■ Təhlükəsizlik: heç bir üzvi reagent tələb olunmur.
■ Yüksək keyfiyyət: Təmizlənmiş RNT fraqmentləri yüksək təmizliyə malikdir, zülaldan və digər çirklərdən azaddır və müxtəlif aşağı axın eksperimental tətbiqlərinə cavab verə bilər.
Məhsul parametrləri
■ Aşağı axın tətbiqləri: birinci zəncir cDNT sintezi, RT-PCR, molekulyar klonlaşdırma, Northern Blot və s.
■ Nümunə: Polisaxaridlərin və polifenolların təzə və ya dondurulmuş bitki toxumaları
■ Doza: 50 mq bitki toxuması
■ Təmizləmə sütununun maksimum RNT bağlama qabiliyyəti: 80 μg
■ Elüsyonun həcmi: 50-200 μl
Kit tətbiqi
O, yüksək polisaxarid və polifenol tərkibli təzə və ya dondurulmuş bitki toxuması nümunələrindən (xüsusilə təzə bitki yarpaq toxuması) ümumi RNT-nin çıxarılması və təmizlənməsi üçün uyğundur.
İş axını
Diaqram
Plant Total RNT Isolation Kit Plus, polisaxaridlərin və polifenolların 50 mq təzə yarpaqlarını emal etdi və 5% təmizlənmiş RNT elektroforezlə sınaqdan keçirildi.
1: banan
2: Ginkgo
3: Pambıq
4: Nar
Saxlama və Raf ömrü
Bu dəst quru şəraitdə otaq temperaturunda (15-25 ℃) 24 ay saxlanıla bilər;daha uzun müddət saxlamaq lazımdırsa, 2–8°C temperaturda saxlanıla bilər.
PSL1 tamponu β-merkaptoetanol əlavə edildikdən sonra 1 ay ərzində 4℃ temperaturda yerləşdirilə bilər (təcrübə zamanı onu əlavə etmək tövsiyə olunur).
Sütun bağlandı
Sütun bağlandıqdan sonra RNT məhsuldarlığı azalır və ya hətta RNT-ni təmizləmək mümkün deyil və əldə edilən RNT kütləsi aşağı olur.
Ümumi səbəb təhlili:
1. Nümunə fasilələri hərtərəfli deyil.
Nümunənin qırılması DNT-TƏMİZLƏMƏ SÜTUNUNUN tamamilə bloklanmasına səbəb olmur, eyni zamanda RNT məhsuldarlığına və keyfiyyətinə təsir göstərir.Nümunələri qırdığınız zaman kifayət qədər maye azotda sürətli üyütmə əməliyyatını tövsiyə edirik, Nümunə hüceyrə divarını, hüceyrə membranını və digər toxumaları əzməyə çalışın.Poliol polisaxaridlərinin bitki nümunələri üçün Plant Total RNT İzolasiya Dəsti PLUS istifadə etməyi tövsiyə edirik.
2. Ayrılmış nümunə supernatantını DNT Təmizləmə Sütunu ilə sorduqda, mümkün hüceyrə parçalanmış çöküntü inhalyasiya edilə bilər.
Alınan hüceyrə parçalanmış çöküntülər RNT adsorbsiya əməliyyatı yerinə yetirildikdə bloklanacaq YALNIZ RNT Sütununa səbəb olacaq (6-cı addıma baxın).Hüceyrə qalıqlarının sorulmaması üçün bu supernatantı çəkərkən diqqətli olmağı tövsiyə edirik.
3. Nümunənin ilkin məbləği həddən artıq çoxdur.
Həddindən artıq nümunə istifadəsi nümunənin natamam parçalanmasına və ya Bufer PSL1 tərəfindən natamam hüceyrə lizisinə səbəb olacaq, nəticədə təmizlənmə zamanı təmizləyici sütunun bloklanmasına səbəb olacaqdır.Bitki Ümumi RNT İzolyasiya Kiti Hər bir təmizlənmiş əməliyyat nümunəsi 50 mq-dır.Poliol polisaxaridlərinin bitki nümunələri üçün Plant Total RNT İzolasiya Dəsti PLUS-u sınamağı tövsiyə edirik.
4. Sentrifuqanın temperaturu çox aşağıdır.
Bütün RNT izolyasiyası və təmizlənməsi prosesi otaq temperaturunda (20-25°C), nümunə toxumasının maye azotla parçalanması istisna olmaqla. Bəzi kriogen sentrifuqaların temperaturu 20-dən aşağıdır.℃, DNT Təmizləmə Sütununun və/və ya Yalnız RNT Sütununun bloklanmasına səbəb ola bilər.Bu baş verərsə, sentrifuqanın temperaturunu 20-25-ə qoyun℃, vəlizis qarışığının və/və ya etanol əlavə edilmiş supernatantın 37 dərəcəyə qədər qızdırıldığından əmin olun.°C.
Çıxarılan RNT yoxdur və ya RNT məhsulu aşağı deyil
Adətən bərpa səmərəliliyinə təsir edən bir çox amil var, məsələn: nümunə RNT tərkibi, əməliyyat üsulu, elüsiya həcmi və s.
Aşağıdakı kimi ümumi səbəblərin təhlili:
1.Əməliyyat zamanı buz vannası və ya aşağı temperaturda (4°C) sentrifuqalama aparıldı.
Təklif: Otaq temperaturunda işləyin (15-25°C) bütün prosesdə buz vannası və aşağı temperaturda sentrifuqa etmə.
2. RNT nümunənin düzgün saxlanmaması və ya nümunənin uzun müddət saxlanılması səbəbindən deqradasiyaya uğramışdır.
Tövsiyə: Təzə toplanmış nümunələr tez maye azotda dondurulmalı və sonra -80°C-də uzun müddət saxlanılmalı, nümunələrin təkrar dondurulması və əriməsinin qarşısını almaq lazımdır;və ya dərhal nümunələri RNT stabilizatoru RNAlater məhlulunda isladın (heyvan nümunələri).
3.Nümunənin qeyri-kafi parçalanması və parçalanması təmizləyici sütunun tıxanmasına gətirib çıxarır.
Təklif: Toxumanı üyüdərkən, toxumanın kifayət qədər üyüdüldüyünə əmin olun və onu tez bir zamanda əvvəlcədən hazırlanmış Bufer PSL1-ə köçürün (düzgün β-ME nisbətinin əlavə olunduğunu təsdiqləyin, prosedurun 1-ci addımına baxın).
4. Eluent səhv əlavə edilib.
Təklif: RNase-Free ddH2O-nun təmizləyici sütun membranının ortasına damladığından əmin olun.
5. Bufer PSL2 və ya PRW2 Buferinə mütləq etanolun düzgün həcmi əlavə edilməmişdir.
Təklif: Lütfən, təlimatlara əməl edin, tam etanolun düzgün həcmini Bufer PSL2 və Bufer PRW2-yə əlavə edin və dəstdən istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.
6. Toxuma nümunəsinin miqdarı uyğun deyil.
Təklif: 500 μl Buffer PSL1 üçün 50 mq toxuma istifadə edin.Həddindən artıq toxuma istifadə etmək çıxarılan RNT miqdarını azaldacaq və nəticədə yaranan RNT-nin saflığı da azalacaq.Biz qəti şəkildə tövsiyə edirik ki, ilkin nümunə dozası hər RNT çıxarılması əməliyyatı üçün 50 mq-dan çox olmamalıdır.
7.Uyğun olmayan elüsiya həcmi və ya natamam elüsyon.
Təklif: Təmizləmə sütununun eluent həcmi 50-200 μl;elüsyon effekti qənaətbəxş deyilsə, əvvəlcədən qızdırılmış RNase-Free ddH2O əlavə etdikdən sonra otaq temperaturunda vaxtı uzatmaq tövsiyə olunur, məsələn 5-10 dəqiqə.
8.Təmizləmə sütununda BufferPRW2 ilə yuyulduqdan sonra etanol qalığı var.
Təklif: Boş boru 1 dəqiqə sentrifuqa edilirsə və Bufer PRW2-də yuyulduqdan sonra hələ də etanol qalırsa, siz boş borunun sentrifuqasiya müddətini 2 dəqiqəyə qədər artıra və ya qalıq etanolun tamamilə çıxarılması üçün təmizləyici sütunu otaq temperaturunda 5 dəqiqəyə yerləşdirə bilərsiniz.
9. Kit səhv istifadə edilmişdir.
Təklif: Polifenolik polisaxaridlərin bitki nümunələri üçün Bitki Ümumi RNT İzolyasiya Kiti kimi ümumi dəstlərdən istifadə etməklə ideal RNT nümunələri əldə etmək mümkün olmaya bilər.Polifenolik polisaxarid bitki nümunələri üçün xüsusi olaraq hazırlanmış Plant Total RNA IsolationKit Plus-dan istifadə etməyi tövsiyə edirik.Polifenol və polisaxarid bitki nümunələrindən RNT çıxarmaq üçün xüsusi hazırlanmış dəst.
OD260/OD280 dəyəri aşağıdır
ddH2O ilə RNT elüsyonu və spektrofotometr oxunuşları üçün istifadə edilən aşağı OD260/OD280 dəyərləri ilə nəticələnir.Nisbətən düzgün OD260/OD280 dəyərlərini əldə etmək üçün 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 istifadə etməyi tövsiyə edirik (RNT-ni təmizləmək üçün RNase-Sərbəst ddH2O əvəzinə), 19-cu səhifədəki “RNT Konsentrasiyası və Təmizləmə Təhlilləri”nə baxın.
Təmizlənmiş RNT pozulur
Təmizlənmiş RNT-nin keyfiyyəti nümunənin qorunması, RNaz ilə çirklənmə və manipulyasiya kimi amillərlə bağlıdır.
Ümumi səbəblərin təhlili:
1.Toxuma nümunələri yığıldıqdan sonra vaxtında saxlanmayıb.
Tövsiyə: Əgər toxuma nümunələri toplandıqdan sonra vaxtında istifadə olunmazsa, onları dərhal aşağı temperaturda maye azotda saxlayın və ya maye azotda tez dondurulduqdan sonra uzunmüddətli saxlama üçün -80°C-yə köçürün və ya nümunələri dərhal RNT stabilizatoru RNAlater məhluluna (heyvan nümunələri) batırın.RNT çıxarılması üçün təzə toplanmış toxuma nümunələrindən istifadə etməyə çalışın.
2.Toxuma nümunələrinin təkrar dondurulması və əriməsi.
Təklif: Toxuma nümunələrini saxlayarkən, konservasiya üçün onları kiçik parçalara ayırmaq və nümunələrin təkrar dondurulması və əriməsi nəticəsində RNT-nin deqradasiyasına yol verməmək üçün istifadə edərkən onların bir hissəsini çıxarmaq yaxşıdır.
3.RNase əməliyyat otağına daxil edilir və ya geyilməyən birdəfəlik əlcəklər, maskalar və s.
Təklif: RNT ekstraksiya təcrübələri ən yaxşı şəkildə ayrı-ayrı RNT əməliyyatlarında aparılır və sınaqdan əvvəl laboratoriya masası təmizlənməlidir və RNaz-ın tətbiqi nəticəsində yaranan RNT deqradasiyasının ən böyük ölçüdə qarşısını almaq üçün təcrübə zamanı birdəfəlik əlcəklər və maskalar taxılmalıdır.
4. İstifadə zamanı reagent RNase ilə çirklənmişdir.
Təklif: Müvafiq təcrübələr üçün bitki ümumi RNT ekstraksiya dəstlərinin yeni seriyası ilə əvəz edin.
5. RNT manipulyasiyası üçün istifadə edilən sentrifuqa boruları və pipet ucları RNaz ilə çirklənmişdir.
Təklif: RNT ekstraksiyasında istifadə olunan sentrifuqa borularının, pipet uclarının, pipetlərin və s.-nin hamısının RNazsız olduğuna əmin olun.
Təlimat kitabçaları:
Bitki Total RNT İzolyasiya Kiti Plus Təlimat Kitabı
