Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-addım qRT-PCR dəstləri
Təsvirlər
Bu dəst RT-qPCR reaksiyaları üçün mədəni hüceyrə nümunələrindən RNT-ni tez buraxa bilən unikal lizis bufer sistemindən istifadə edir və bununla da vaxt aparan və zəhmətli RNT təmizləmə prosesini aradan qaldırır.RNT şablonu cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.5×Birbaşa RT Mix və 2×Kit tərəfindən təmin edilən birbaşa qPCR Mix-SYBR reagentləri real vaxtda kəmiyyət PCR nəticələrini tez və effektiv şəkildə əldə edə bilər.
5×Birbaşa RT Mix və 2×Birbaşa qPCR Mix-SYBR güclü inhibitor tolerantlığına malikdir və nümunələrin lizatından birbaşa RT-qPCR üçün şablon kimi istifadə edilə bilər.Bu dəstdə unikal RNT yüksək yaxınlıqlı Foregene əks transkriptaza və İsti D-Taq DNT polimeraza, dNTPs, MgCl var.2, reaksiya buferi, PCR optimallaşdırıcısı və stabilizatoru.
Spesifikasiyalar
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponentləri
| I hissə | Bufer CL |
| Foregene Proteaz Plus II | |
| Bufer ST | |
| II hissə | DNT pozan |
| 5 × Birbaşa RT Qarışığı | |
| 2× Birbaşa qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX İstinad Boyası | |
| RNazsız ddH2O | |
| Təlimatlar | |
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
■Sadə və effektiv: Cell Direct RT texnologiyası ilə RNT nümunələri cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.
■ Nümunə tələbi kiçikdir, ən azı 10 hüceyrə sınaqdan keçirilə bilər.
■ Yüksək ötürmə qabiliyyəti: 384, 96, 24, 12, 6 quyulu lövhələrdə yetişdirilmiş hüceyrələrdə RNT-ni tez aşkar edə bilir.
■ DNT Eraser sərbəst buraxılmış genomları tez bir zamanda silə bilər, sonrakı eksperimental nəticələrə təsiri xeyli azalda bilər.
■ Optimallaşdırılmış RT və qPCR sistemi iki addımlı RT-PCR əks transkripsiyasını daha səmərəli və PCR-ni daha spesifik və RT-qPCR reaksiya inhibitorlarına qarşı daha davamlı edir.
Kit tətbiqi
Tətbiq sahəsi: mədəni hüceyrələr.
- Nümunə lizisi ilə buraxılan RNT: yalnız bu dəstin RT-qPCR şablonuna tətbiq edilir.
- Kit aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə edilə bilər: gen ifadə analizi, siRNA vasitəçiliyi ilə gen susdurucu təsirinin yoxlanılması, dərman skrininqi və s.
Diaqram
Saxlama və Raf ömrü
Bu dəstin I hissəsi 4℃ temperaturda saxlanmalıdır;II hissə -20 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4-də saxlanmalıdır℃, -20℃-də dondurmayın.
Reagent 2×Birbaşa qPCR Mix-SYBR -20 səviyyəsində saxlanmalıdır℃qaranlıqda;tez-tez istifadə olunarsa, 4-də də saxlanıla bilər℃ qısamüddətli saxlama üçün (10 gün ərzində istifadə edin).
Real Time PCR primer dizayn prinsipləri
İrəli Astar və Ters Astar
Real Time PCR üçün primer dizaynı çox vacibdir.Primerlər PCR gücləndirilməsinin spesifikliyi və səmərəliliyi ilə bağlıdır və aşağıdakı prinsiplərə istinad edərək tərtib edilə bilər:
Astar uzunluğu: 18-30bp.
GC tərkibi: 40-60%.
Tm dəyəri: Primer 5 kimi primer dizayn proqramı primerin Tm dəyərini verə bilər.Yuxarı və aşağı axın primerlərinin Tm dəyərləri mümkün qədər yaxın olmalıdır.Tm hesablama düsturu da istifadə edilə bilər: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR həyata keçirərkən, 5 °C primer Tm dəyərindən aşağı olan temperatur ümumiyyətlə yumşalma temperaturu kimi seçilir (bağlama temperaturunda müvafiq artım PZR reaksiyasının spesifikliyini artıra bilər).
Primerlər və PCR məhsulları:
Dizayn primerinin PCR gücləndirmə məhsulunun uzunluğu tercihen 100-150bp-dir.
Şablonun ikinci dərəcəli struktur sahəsindəki dizayn astarlarından mümkün qədər çəkinmək lazımdır.
Yuxarı və aşağı axın primerlərinin 3′ ucları arasında 2 və ya daha çox tamamlayıcı əsasın əmələ gəlməsindən çəkinin.
Primer 3′ terminal bazası əlavə 3 ardıcıl G və ya C ilə mövcud ola bilməz.
Astarların özləri tamamlayıcı strukturlara malik ola bilməzlər, əks halda PCR gücləndirilməsinə təsir edən saç tıxacının quruluşu yaranacaq.
ATCG primer ardıcıllığında mümkün qədər bərabər paylanmalı və T kimi 3′ terminal bazasından qaçınılmalıdır.
Əlavə 1:Cell Direct RT-qPCR Kit komponent əlavə paketi
1.Hüceyrə lizisi məhlulu
|
| |||
| Kit komponentləri (24 quyu lizis sistemi / quyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| HissəI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HissəII | DNT pozan | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Qarışıq
|
| |
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Birbaşa RT Qarışığı | 800 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Birbaşa qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX İstinad Boyası | 40 μl | 200 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Təlimat kitabçaları:
