(96 quyu) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Təsvirlər
The(96 quyu) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Yaşıl Itəmin edirunikal lizis bufer sistemito RNT-ni tez buraxırmədəni hüceyrədənRT-qPCR reaksiyaları üçün nümunələr, vaxt aparan və zəhmət tələb edənləri aradan qaldırırRNT təmizləmə prosesi və tələb olunan RNT şablonunu əldə etmək yalnız 7 dəqiqə çəkir.The5 × Birbaşa RT Qarışığıvə2× Birbaşa qPCR Mix-SYBRqutusunda verilir tez vereal vaxt kəmiyyətini effektiv şəkildə əldə edinPCR nəticələri.
5× Direct RT Mix və 2× Direct qPCR Mix-SYBR güclü inhibitor tolerantlığına malikdir və effektiv əks transkripsiya və spesifik gücləndirmə üçün şablon kimi sınaqdan keçiriləcək nümunənin lizatından istifadə edə bilər.Reagentin tərkibində RNT-yə yüksək yaxınlığa malik Foregene unikal Reverse Transkriptaza, həmçinin İsti D-Taq DNT Polimeraz, dNTPs, MgCl var.2 , reaksiya tamponu, PCR optimallaşdırıcısı və stabilizatoru və nümunəni tez, asan və dəqiq aşkar etmək üçün liziz tamponu ilə birlikdə istifadə edilə bilər və yüksək həssaslıq, güclü spesifiklik və yaxşı sabitlik xüsusiyyətlərinə malikdir.
Dəst 96 quyu mədəni hüceyrələrin mikro-sistem lizisinə yönəlib və yaxşı vahidliyə və konsistensiyaya malikdir;dəst komponentləri reagentlərin təkrar açılması, dondurulması və əriməsi nəticəsində yaranan çirklənmədən və reagentin performansının pisləşməsindən qaçaraq birdəfəlik istifadə üçün 96 quyulu hüceyrə lövhəsinə cavab verə bilən 96 liziz reaksiyası, 96 əks transkripsiya reaksiyası və 96×2 qPCR reaksiyasını təmin edir.
Kit komponentləri
| Kit tərkibi ( 50 μL lizis sistemi/20 μLRT reaksiya sistemi /20μL qPCR reaksiya sistemi) | DRT-03011 | Qeyd | |
| 96T | |||
| HissəI | BuferCL | 5 ml | HüceyrəLizis |
| ForegeneProteaz Plus II | 100 μL | ||
| BuferST | 500 μL | ||
| Hissə II | DNTSilgi | 100 μL | |
| 5 × Birbaşa RT Qarışığı | 400 μL | RT | |
| 2× Birbaşa qPCR Qarışığı-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX İstinad Boyası | 400µL | ||
| RNase- Pulsuzgg2 O | 1,7 ml |
| |
| Millik | 1 hissə | 1 porsiya | |
*: Lizis reagenti DNT Eraser dəstin II hissəsinə daxildir;Cell Lysis, RT və qPCR komponentləri ayrıca satın alına bilər.
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
■Sadə və effektiv: Cell Direct RT texnologiyası ilə RNT nümunələri cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.
■ Nümunə tələbi kiçikdir, ən azı 10 hüceyrə sınaqdan keçirilə bilər.
■ Yüksək ötürmə qabiliyyəti: 384, 96, 24, 12, 6 quyulu lövhələrdə yetişdirilmiş hüceyrələrdə RNT-ni tez aşkar edə bilir.
■ DNT Eraser sərbəst buraxılmış genomları tez bir zamanda silə bilər, sonrakı eksperimental nəticələrə təsiri xeyli azalda bilər.
■ Optimallaşdırılmış RT və qPCR sistemi iki addımlı RT-PCR əks transkripsiyasını daha səmərəli və PCR-ni daha spesifik və RT-qPCR reaksiya inhibitorlarına qarşı daha davamlı edir.
Kit tətbiqi
Tətbiq sahəsi: mədəni hüceyrələr.
- Nümunə lizisi ilə buraxılan RNT: yalnız bu dəstin RT-qPCR şablonuna tətbiq edilir.
- Kit aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə edilə bilər: gen ifadə analizi, siRNA vasitəçiliyi ilə gen susdurucu təsirinin yoxlanılması, dərman skrininqi və s.
Saxlama və Raf ömrü
Bu dəstin I hissəsi 4-də saxlanmalıdır℃;II hissə -20 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4-də saxlanmalıdır℃, -20℃-də dondurmayın.
Reagent 2×Birbaşa qPCR Mix-Taqman -20 səviyyəsində saxlanmalıdır℃qaranlıqda;tez-tez istifadə olunarsa, 4-də də saxlanıla bilər℃ qısamüddətli saxlama üçün (10 gün ərzində istifadə edin).
Real Time PCR primer dizayn prinsipləri
İrəli Astar və Ters Astar
Real Time PCR üçün primer dizaynı çox vacibdir.Primerlər PCR gücləndirilməsinin spesifikliyi və səmərəliliyi ilə bağlıdır və aşağıdakı prinsiplərə istinad edərək tərtib edilə bilər:
- Astar uzunluğu: 18-30bp.
- GC tərkibi: 40-60%.
- Tm dəyəri: Primer 5 kimi primer dizayn proqramı primerin Tm dəyərini verə bilər.Yuxarı və aşağı axın primerlərinin Tm dəyərləri mümkün qədər yaxın olmalıdır.Tm hesablama düsturu da istifadə edilə bilər: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR həyata keçirərkən, 5 °C primer Tm dəyərindən aşağı olan temperatur ümumiyyətlə yumşalma temperaturu kimi seçilir (bağlama temperaturunda müvafiq artım PZR reaksiyasının spesifikliyini artıra bilər).
- Primerlər və PCR məhsulları:
- Dizayn primerinin PCR gücləndirmə məhsulunun uzunluğu tercihen 100-150bp-dir.
- Şablonun ikinci dərəcəli struktur sahəsindəki dizayn astarlarından mümkün qədər çəkinmək lazımdır.
- Yuxarı və aşağı axın primerlərinin 3′ ucları arasında 2 və ya daha çox tamamlayıcı əsasın əmələ gəlməsindən çəkinin.
- Primer 3′ terminal bazası əlavə 3 ardıcıl G və ya C ilə mövcud ola bilməz.
- Astarların özləri tamamlayıcı strukturlara malik ola bilməzlər, əks halda PCR gücləndirilməsinə təsir edən saç tıxacının quruluşu yaranacaq.
- ATCG primer ardıcıllığında mümkün qədər bərabər paylanmalı və T kimi 3′ terminal bazasından qaçınılmalıdır.
Əlavə1:Cell DirectRT-qPCR Komponent dəstit əlavə paketi
1.Hüceyrə lizisi məhlulu
| Hüceyrə lizisi məhlulu | |||
| Kit komponentləri (24 quyu lizis sistemi / quyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| HissəI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HissəII | DNT pozan | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Birbaşa RT Qarışığı | 800 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Qarışığı | ||
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Birbaşa qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX İstinad Boyası | 40 μl | 200 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Təlimat kitabçaları:
