Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-addım qRT-PCR Kits Probe
Təsvirlər
Bu məhsul RT-qPCR reaksiyaları üçün yetişdirilmiş hüceyrə nümunələrindən RNT-ni tez bir zamanda buraxmaq üçün unikal lizis bufer sistemindən istifadə edir, vaxt aparan və zəhmət tələb edən RNT təmizləmə prosesini aradan qaldırır və tələb olunan RNT şablonunu əldə etmək üçün cəmi 7 dəqiqə, 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ilə PCR tərəfindən tez və effektiv real vaxtda effektiv nəticələr əldə edə bilir.
5× Direct RT Mix və 2× Direct qPCR Mix-Taqman güclü inhibitor dözümlülüyünə malikdir və şablon kimi ölçüləcək nümunənin lizatından istifadə edərək səmərəli geri çevrilmə və spesifik gücləndirmə həyata keçirə bilər.Reagent Foregene Reverse Transkriptaza, İsti D-Taq DNT Polimeraz, dNTPs, MgCl ehtiva edir.2Nümunələri tez və asanlıqla aşkar etmək üçün lizis buferi ilə birlikdə istifadə oluna bilən və yüksək həssaslıq, spesifiklik və stabillik xüsusiyyətlərinə malik olan Reaction Bufer, PCR Optimizer və Stabilizer.
Spesifikasiyalar
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponentləri
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit komponentləri 20μl qPCR Reaksiya Sistemi | DRT-01021 | DRT-01022 | Qeyd | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Hissə I | Bufer CL | 4 ml | 20 ml | Hüceyrə lizisi |
| Foregene Proteaz Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Bufer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Hissə II | DNT pozan | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Birbaşa qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX İstinad Boyası | 40 μl | 200 μl | ||
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Təlimat | 1 ədəd | 1 ədəd | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ayrıca alına bilər
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
■Sadə və effektiv: Cell Direct RT texnologiyası ilə RNT nümunələri cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.
■ Nümunə tələbi kiçikdir, ən azı 10 hüceyrə sınaqdan keçirilə bilər.
■ Yüksək ötürmə qabiliyyəti: 384, 96, 24, 12, 6 quyulu lövhələrdə yetişdirilmiş hüceyrələrdə RNT-ni tez aşkar edə bilir.
■ DNT Eraser sərbəst buraxılmış genomları tez bir zamanda silə bilər, sonrakı eksperimental nəticələrə təsiri xeyli azalda bilər.
■ Optimallaşdırılmış RT və qPCR sistemi iki addımlı RT-PCR əks transkripsiyasını daha səmərəli və PCR-ni daha spesifik və RT-qPCR reaksiya inhibitorlarına qarşı daha davamlı edir.
Kit tətbiqi
Tətbiq sahəsi: mədəni hüceyrələr.
- Nümunə lizisi ilə buraxılan RNT: yalnız bu dəstin RT-qPCR şablonuna tətbiq edilir.
- Kit aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə edilə bilər: gen ifadə analizi, siRNA vasitəçiliyi ilə gen susdurucu təsirinin yoxlanılması, dərman skrininqi və s.
Saxlama və Raf ömrü
Bu dəstin I hissəsi 4-də saxlanmalıdır℃;II hissə -20 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır.
Foregene Protease Plus II 4-də saxlanmalıdır℃, -20℃-də dondurmayın.
Reagent 2×Birbaşa qPCR Mix-Taqman -20 səviyyəsində saxlanmalıdır℃qaranlıqda;tez-tez istifadə olunarsa, 4-də də saxlanıla bilər℃ qısamüddətli saxlama üçün (10 gün ərzində istifadə edin).
Real Time PCR primer dizayn prinsipləri
İrəli Astar və Ters Astar
Real Time PCR üçün primer dizaynı çox vacibdir.Primerlər PCR gücləndirilməsinin spesifikliyi və səmərəliliyi ilə bağlıdır və aşağıdakı prinsiplərə istinad edərək tərtib edilə bilər:
- Astar uzunluğu: 18-30bp.
- GC tərkibi: 40-60%.
- Tm dəyəri: Primer 5 kimi primer dizayn proqramı primerin Tm dəyərini verə bilər.Yuxarı və aşağı axın primerlərinin Tm dəyərləri mümkün qədər yaxın olmalıdır.Tm hesablama düsturu da istifadə edilə bilər: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR həyata keçirərkən, 5 °C primer Tm dəyərindən aşağı olan temperatur ümumiyyətlə yumşalma temperaturu kimi seçilir (bağlama temperaturunda müvafiq artım PZR reaksiyasının spesifikliyini artıra bilər).
- Primerlər və PCR məhsulları:
- Dizayn primerinin PCR gücləndirmə məhsulunun uzunluğu tercihen 100-150bp-dir.
- Şablonun ikinci dərəcəli struktur sahəsindəki dizayn astarlarından mümkün qədər çəkinmək lazımdır.
- Yuxarı və aşağı axın primerlərinin 3′ ucları arasında 2 və ya daha çox tamamlayıcı əsasın əmələ gəlməsindən çəkinin.
- Primer 3′ terminal bazası əlavə 3 ardıcıl G və ya C ilə mövcud ola bilməz.
- Astarların özləri tamamlayıcı strukturlara malik ola bilməzlər, əks halda PCR gücləndirilməsinə təsir edən saç tıxacının quruluşu yaranacaq.
- ATCG primer ardıcıllığında mümkün qədər bərabər paylanmalı və T kimi 3′ terminal bazasından qaçınılmalıdır.
Əlavə1:Cell DirectRT-qPCR Komponent dəstit əlavə paketi
1.Hüceyrə lizisi məhlulu
| Hüceyrə lizisi məhlulu | |||
| Kit komponentləri (24 quyu lizis sistemi / quyu) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| HissəI | Bufer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Proteaz Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Bufer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HissəII | DNT pozan | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Birbaşa RT Qarışığı | 800 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Qarışığı | ||
| Kit komponentləri (20 μl reaksiya sistemi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Birbaşa qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX İstinad Boyası | 40 μl | 200 μl |
| RNazsız ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Təlimat kitabçaları:
