Gücləndirmə siqnalları yoxdur

1.Dəstdəki Taq DNT Polimerase düzgün saxlanmaması və ya dəstin istifadə müddəti bitməsi səbəbindən fəaliyyətini itirir.
Tövsiyə: Kitin saxlanma şərtlərini təsdiqləyin;PCR sisteminə lazımi miqdarda Taq DNT Polimerase əlavə edin və ya əlaqəli təcrübələr üçün yeni Real Time PCR Kit satın alın.

2.DNT şablonunda çoxlu Taq DNT Polimeraz inhibitorları var.
Təklif: Şablonu yenidən təmizləyin və ya istifadə olunan şablonun miqdarını azaldın.

3. Mg2+ konsentrasiyası uyğun deyil.
Tövsiyə: Təqdim etdiyimiz 2× Real PCR Qarışığının Mg2+ konsentrasiyası 3,5 mM-dir.Bununla belə, bəzi xüsusi primerlər və şablonlar üçün Mg2+ konsentrasiyası daha yüksək ola bilər.Beləliklə, Mg2+ konsentrasiyasını optimallaşdırmaq üçün birbaşa MgCl2 əlavə edə bilərsiniz.Optimallaşdırma üçün hər dəfə Mg2+ 0,5 mM artırmaq tövsiyə olunur.

4. PCR gücləndirmə şərtləri uyğun deyil və primerin ardıcıllığı və ya konsentrasiyası düzgün deyil.
Təklif: primer ardıcıllığının düzgünlüyünü təsdiqləyin və primer pozulmayıb;gücləndirmə siqnalı yaxşı deyilsə, yumşalma temperaturunu aşağı salmağa və primer konsentrasiyasını müvafiq şəkildə tənzimləməyə çalışın.

5.Şablonun miqdarı çox az və ya çoxdur.
Tövsiyə: Şablon xəttiləşdirmə qradiyenti seyreltməsini həyata keçirin və Real Time PCR təcrübəsi üçün ən yaxşı PCR effekti ilə şablon konsentrasiyasını seçin.

NTC çox yüksək flüoresan dəyərinə malikdir

1. Əməliyyat zamanı yaranan reagentlərin çirklənməsi.
Tövsiyə: Real Time PCR təcrübələri üçün yeni reagentlərlə əvəz edin.

2.PZR reaksiya sisteminin hazırlanması zamanı çirklənmə baş verdi.
Tövsiyə: Əməliyyat zamanı zəruri qoruyucu tədbirləri həyata keçirin, məsələn: lateks əlcəklər geyinmək, filtrli pipet ucundan istifadə etmək və s.

3. Primerlər deqradasiyaya uğrayır və primerlərin deqradasiyası qeyri-spesifik gücləndirməyə səbəb olacaq.
Təklif: Primerlərin deqradasiyası olub-olmadığını aşkar etmək üçün SDS-PAGE elektroforezindən istifadə edin və Real Time PCR təcrübələri üçün onları yeni primerlərlə əvəz edin.

Primer dimer və ya qeyri-spesifik gücləndirmə

1. Mg2+ konsentrasiyası uyğun deyil.
Tövsiyə: Təqdim etdiyimiz 2× Real PCR EasyTM Mix-in Mg2+ konsentrasiyası 3,5 mM-dir.Bununla belə, bəzi xüsusi primerlər və şablonlar üçün Mg2+ konsentrasiyası daha yüksək ola bilər.Beləliklə, Mg2+ konsentrasiyasını optimallaşdırmaq üçün birbaşa MgCl2 əlavə edə bilərsiniz.Optimallaşdırma üçün hər dəfə Mg2+ 0,5 mM artırmaq tövsiyə olunur.

2. PCR yumşalma temperaturu çox aşağıdır.
Təklif: Hər dəfə PCR yumşalma temperaturunu 1℃ və ya 2℃ artırın.

3. PCR məhsulu çox uzundur.
Tövsiyə: Real Time PCR məhsulunun uzunluğu 100-150bp arasında olmalıdır, 500bp-dən çox olmamalıdır.

4. Primerlər deqradasiyaya uğrayır və primerlərin deqradasiyası xüsusi gücləndirmənin yaranmasına səbəb olacaqdır.
Təklif: Primerlərin deqradasiyası olub-olmadığını aşkar etmək üçün SDS-PAGE elektroforezindən istifadə edin və Real Time PCR təcrübələri üçün onları yeni primerlərlə əvəz edin.

5. PCR sistemi düzgün deyil və ya sistem çox kiçikdir.
Təklif: PCR reaksiya sisteminin çox kiçik olması aşkarlama dəqiqliyinin azalmasına səbəb olacaq.Real Time PCR təcrübəsini yenidən həyata keçirmək üçün kəmiyyət PCR aləti tərəfindən tövsiyə olunan reaksiya sistemindən istifadə etmək ən yaxşısıdır.

Kəmiyyət qiymətlərinin zəif təkrarlanması

1. Alət nasazdır.
Təklif: Alətin hər bir PCR deşiyi arasında xətalar ola bilər ki, bu da temperaturun idarə edilməsi və ya aşkarlanması zamanı zəif təkrarlanma ilə nəticələnir.Müvafiq alətin təlimatlarına uyğun olaraq yoxlayın.

2.Nümunə təmizliyi yaxşı deyil.
Tövsiyə: Natəmiz nümunələr şablon və primerlərin təmizliyini ehtiva edən eksperimentin zəif təkrarlanmasına səbəb olacaq.Şablonu yenidən təmizləmək ən yaxşısıdır və primerlər SDS-PAGE ilə ən yaxşı şəkildə təmizlənir.

3. PCR sisteminin hazırlanması və saxlanma müddəti çox uzundur.
Təklif: Hazırlandıqdan dərhal sonra PCR təcrübəsi üçün Real Time PCR sistemindən istifadə edin və onu çox uzun müddət kənarda saxlamayın.

4. PCR gücləndirmə şərtləri uyğun deyil və primerin ardıcıllığı və ya konsentrasiyası düzgün deyil.
Təklif: primer ardıcıllığının düzgünlüyünü təsdiqləyin və primer pozulmayıb;gücləndirmə siqnalı yaxşı deyilsə, yumşalma temperaturunu aşağı salmağa və primer konsentrasiyasını müvafiq şəkildə tənzimləməyə çalışın.

5. PCR sistemi düzgün deyil və ya sistem çox kiçikdir.
Təklif: PCR reaksiya sisteminin çox kiçik olması aşkarlama dəqiqliyinin azalmasına səbəb olacaq.Real Time PCR təcrübəsini yenidən həyata keçirmək üçün kəmiyyət PCR aləti tərəfindən tövsiyə olunan reaksiya sistemindən istifadə etmək ən yaxşısıdır.