Problemlərin təhlili üçün təlimatlar

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Heç bir RNT çıxarıla bilməz və ya nuklein turşusunun məhsuldarlığı aşağıdır

Adətən bərpa səmərəliliyinə təsir edən bir çox amil var, məsələn: nümunə RNT tərkibi, əməliyyat metodu, elüsiya həcmi və s..

Ümumi səbəblərin təhlili:

1.Buz vannası və ya əməliyyat zamanı aşağı temperaturda (4°C) sentrifuqasiya.

Təklif: Otaq temperaturu (15-25 ° C) işləmə, heç vaxt buz vannası və aşağı temperaturlu sentrifuqa.

2. Nümunənin düzgün saxlanmaması və ya nümunənin çox uzun müddət saxlanılması.

Təklif: Nümunələri -80 ° C-də saxlayın və ya maye azotda dondurun və təkrar dondurma-ərimə istifadəsindən çəkinin;RNT çıxarılması üçün təzə toplanmış nümunələrdən istifadə etməyə çalışın.

3. Qeyri-kafi nümunə lizisi

Tövsiyə: Nümunənin və işçi məhlulun (Xətti Akrilamid) hərtərəfli qarışdırıldığından və otaq temperaturunda (15-25°C) 10 dəqiqə inkubasiya olunduğundan əmin olun.

4. Eluent səhv əlavə edilib

Tövsiyə: RNase-Free ddH2O-nun təmizləyici sütunun membranının ortasına əlavə olunduğundan əmin olun.

5. Bufer viRW2-də susuz etanolun düzgün olmayan həcmi

Təklif: Təlimatlara əməl edin, viRW2 tamponuna düzgün həcmdə susuz etanol əlavə edin və dəsti istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.

6.Yanlış nümunə istifadəsi.

Təklif: 500μl Bufer viRL üçün 200µl nümunə.Həddindən artıq nümunə həcmi RNT hasilatı sürətinin azalması ilə nəticələnəcək.

7.Yanlış elüsyon həcmi və ya natamam elüsyon.

Təklif: Təmizləmə sütununun eluent həcmi 30-50μl-dir;elüsyon effekti qənaətbəxş deyilsə, əvvəlcədən qızdırılan RNase-Free ddH əlavə etmək tövsiyə olunur.₂O və otaq temperaturunda yerləşdirmə müddətini uzatın, məsələn 5-10min

8.Təmizləmə sütununda viRW2 Buferində yuyulduqdan sonra etanol qalığı var.

Təklif: Bufer viRW2-də yuyulduqdan və 2 dəqiqə boş boru sentrifuqasından sonra etanol hələ də qalırsa, qalan etanolun tamamilə çıxarılması üçün təmizləyici sütun boş boru sentrifuqasından sonra otaq temperaturunda 5 dəqiqə qala bilər.

Təmizlənmiş RNT molekullarının deqradasiyası

Təmizlənmiş RNT-nin keyfiyyəti nümunənin saxlanması, RNaz ilə çirklənməsi və əməliyyat kimi amillərlə bağlıdır.

Ümumi səbəblərin təhlili:

1.Toplanmış nümunələr vaxtında saxlanmayıb.

Təklif: Nümunə yığıldıqdan sonra vaxtında istifadə olunmazsa, onu dərhal -80 ℃ və ya maye azotda saxlayın.RNT molekullarının çıxarılması üçün mümkün olduqda təzə toplanmış nümunələrdən istifadə etməyə çalışın.

2.Toplanan nümunələr dəfələrlə dondurulur və əridilir.

Təklif: Nümunələrin toplanması və saxlanması zamanı təkrar dondurma və əritmədən (bir dəfədən çox olmamaqla) çəkinin, əks halda nuklein turşusunun məhsuldarlığı azalacaq.

3.RNase əməliyyat otağında tətbiq olundu və ya birdəfəlik əlcək, maska ​​və s. taxılmadı.

Təklif: RNT molekullarının çıxarılması təcrübəsi ən yaxşı şəkildə ayrıca RNT əməliyyat otağında aparılır və təcrübə masası təcrübədən əvvəl təmizlənir.Təcrübə zamanı RNaz-ın tətbiqi nəticəsində RNT deqradasiyasının qarşısını almaq üçün birdəfəlik əlcəklər və maskalar taxın.

4. İstifadə zamanı reagent RNaz ilə çirklənmişdir.

Təklif: Əlaqədar təcrübələr üçün yeni Viral RNT İzolyasiya Kiti ilə əvəz edin.

5.Sentrifuqa borularının, pipet uclarının və s. RNase ilə çirklənməsi. Təklif: sentrifuqa borularının, pipet uclarının və pipetlərin hamısının RNazsız olduğuna əmin olun.

Təmizlənmiş RNT molekulları aşağı axın təcrübələrinə təsir etdi

Təmizləmə sütunu ilə təmizlənmiş RNT molekulları, həddindən artıq duz ionları və ya zülallar olduqda, aşağı axın təcrübələrinə təsir edəcək, məsələn: tərs transkripsiya, Northern Blot və s..

1.Elüt edilmiş RNT molekullarında duz ionları qalır.

Tövsiyə: Bufer viRW2-yə düzgün həcmdə susuz etanol əlavə olunduğundan əmin olun və əməliyyat təlimatlarında göstərilən düzgün sentrifuqa sürətinə uyğun olaraq təmizləmə sütununu iki dəfə yuyun; Əgər duz ionları hələ də qalırsa, siz təmizləyici sütuna viRW2 tamponunu əlavə edib otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxa bilərsiniz.Daha sonra duz ionlarının çirklənməsini maksimum dərəcədə aradan qaldırmaq üçün sentrifuqa edin

2.Elüt edilmiş RNT molekullarında qalan etanol var

Təklif: təmizləyici sütunların Bufer viRW2 ilə yuyulduğunu təsdiqlədikdən sonra, əməliyyat təlimatlarında göstərilən mərkəzdənqaçma sürətinə uyğun olaraq boş boru sentrifuqasını həyata keçirin.Əgər hələ də etanol qalırsa, qalan etanolu maksimum dərəcədə çıxarmaq üçün boş boru sentrifuqasından sonra otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxıla bilər.

Təlimat kitabçaları:

Viral RNT İzolyasiya Kiti Təlimat Kitabı