Escherichia Coli O157: H7 Nuklein Turşusu Aşkarlama Dəsti (PCR Floresan Zond Metod/Liofilizasiya)
Kit təsviri:
Cat.No.FP103
Qida, yem, su nümunələri və ətraf mühit nümunələrində E. coli O157:H7-nin sürətli aşkar edilməsi və skrininqi üçün istifadə olunur.
Təsvirlər
Üçün istifadə olunurQida, yem, su nümunələri və ətraf mühit nümunələrində E. coli O157:H7-nin sürətli aşkarlanması və skrininqi.
[Sınaq prinsipi]
Floresan PZR texnologiyası prinsipinə uyğun olaraq, xüsusi primerlər və Taqman zondları Escherichia coli O157: H7-nin spesifik geni üçün nəzərdə tutulmuşdur və Escherichia coli O157: H7-nin aşkarlanmasını həyata keçirmək üçün flüoresan PCR cihazı ilə aşkar edilmişdir.
Kit İçindəkilər
Qeyd: ROX kanal zondu daxil deyil.
| Copponentlər | Spesifikasiya | Qvahidlik |
| Bufer A | boru | 1 |
| Bufer B | boru | 1 |
| Müsbət nəzarət | boru | 1 |
| Mənfi nəzarət | boru | 1 |
Gözlənilən İstifadə
Üçün istifadə olunur Qida, yem, su nümunələri və ətraf mühit nümunələrində E. coli O157:H7-nin sürətli aşkarlanması və skrininqi.
Saxlama Şərtləri və Yararlılıq Tarixi
Qaranlıqda -20 ℃ temperaturda saxlayın və təkrar dondurma və ərimədən çəkinin.
Etibarlılıq müddəti 12-diraylar, istehsal tarixi isə xarici qablaşdırmada göstərilir.
Alətlər və İstehlak Malları
Floresan kəmiyyət PCR aləti, pipet tabancası və uyğun uclar, burulğan çalkalayıcı, mini sentrifuq.
İstifadəsi
1. Nümunə emalı
1.1 Nümunə növü: Bu dəst qida, yem, su nümunələri və Escherichia coli O157:H7 ilə çirkləndiyi ehtimal edilən digər nümunələr üçün uyğundur.Dərin emal edilmiş ət məhsulları, içkilər və tərkibində piqmentlər olan digər maddələr üçün flüoresan siqnal toplanmasına təsir etməmək üçün onları yaxalamaq lazımdır.
1.2 Nümunənin emalı: Nümunə hazırlamaq, zənginləşdirmə mədəniyyəti və Escherichia coli O157: H7-nin təcrid edilməsi üçün "GB 4789.10-2016 Qida Təhlükəsizliyi Milli Standart Qida Mikrobioloji Escherichia coli O157 müayinəsi: H7 Testi"nə baxın.
- Nuklein turşusunun çıxarılması
1,5 ml sentrifuqa borusuna 20 mL zənginləşdirmə məhlulu götürün, 200 μL mikrob lizat əlavə edin (əlavə dəst tələb olunur), 30 saniyə burulğan edin, qısa müddətə sentrifuqa edin və kənara qoyun.
Qeydlər: Lizatdan nuklein turşusunun çıxarılması 10 dəqiqə ərzində tamamlanmalıdır və uzun müddət saxlanıla bilməz.
3. Nuklein turşusunun gücləndirilməsi
3.1 İstifadə üçün flüoresan kəmiyyət PCR alətini yandırın.
Kitdən A tamponu və B tamponunu yaxşıca əridin və qısa müddətə sentrifuqa edin.Hər bir PCR reaksiya borusuna 18 μL Bufer A və 2 μL Bufer B əlavə edin.Sonra PCR reaksiya borularına mənfi nəzarət, ekstraksiya edilmiş nuklein turşusu və müsbət nəzarətin hər birinə 5 mL əlavə edin, boruların qapağını bağlayın və qısa müddətə sentrifuqa edin.
3.3 PCR reaksiya borusunu flüoresan PCR maşınına köçürün və gücləndirmə təcrübələrini yerinə yetirmək üçün aşağıdakı prosedurlardan istifadə edin: reaksiya sistemi üçün 25 mL seçin, hər dövr üçün 60°C-də flüoresan siqnalları toplayın və aşkarlama kanalı üçün FAM seçin.
| addım | Proqram | Dövrlərin sayı |
| 1 | 37℃ 5 dəq | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 dəq | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (flüoresan toplayın) |
Problemlərin təhlili üçün təlimatlar
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Heç bir RNT çıxarıla bilməz və ya nuklein turşusunun məhsuldarlığı aşağıdır
Adətən bərpa səmərəliliyinə təsir edən bir çox amil var, məsələn: nümunə RNT tərkibi, əməliyyat metodu, elüsiya həcmi və s..
Ümumi səbəblərin təhlili:
1.Buz vannası və ya əməliyyat zamanı aşağı temperaturda (4°C) sentrifuqasiya.
Təklif: Otaq temperaturu (15-25 ° C) işləmə, heç vaxt buz vannası və aşağı temperaturlu sentrifuqa.
2. Nümunənin düzgün saxlanmaması və ya nümunənin çox uzun müddət saxlanılması.
Təklif: Nümunələri -80 ° C-də saxlayın və ya maye azotda dondurun və təkrar dondurma-ərimə istifadəsindən çəkinin;RNT çıxarılması üçün təzə toplanmış nümunələrdən istifadə etməyə çalışın.
3. Qeyri-kafi nümunə lizisi
Tövsiyə: Nümunənin və işçi məhlulun (Xətti Akrilamid) hərtərəfli qarışdırıldığından və otaq temperaturunda (15-25°C) 10 dəqiqə inkubasiya olunduğundan əmin olun.
4. Eluent səhv əlavə edilib
Tövsiyə: RNase-Free ddH2O-nun təmizləyici sütunun membranının ortasına əlavə olunduğundan əmin olun.
5. Bufer viRW2-də susuz etanolun düzgün olmayan həcmi
Təklif: Təlimatlara əməl edin, viRW2 tamponuna düzgün həcmdə susuz etanol əlavə edin və dəsti istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.
6.Yanlış nümunə istifadəsi.
Təklif: 500μl Bufer viRL üçün 200µl nümunə.Həddindən artıq nümunə həcmi RNT hasilatı sürətinin azalması ilə nəticələnəcək.
7.Yanlış elüsyon həcmi və ya natamam elüsyon.
Təklif: Təmizləmə sütununun eluent həcmi 30-50μl-dir;elüsyon effekti qənaətbəxş deyilsə, əvvəlcədən qızdırılan RNase-Free ddH əlavə etmək tövsiyə olunur.2O və otaq temperaturunda yerləşdirmə müddətini uzatın, məsələn 5-10min
8.Təmizləmə sütununda viRW2 Buferində yuyulduqdan sonra etanol qalığı var.
Təklif: Bufer viRW2-də yuyulduqdan və 2 dəqiqə boş boru sentrifuqasından sonra etanol hələ də qalırsa, qalan etanolun tamamilə çıxarılması üçün təmizləyici sütun boş boru sentrifuqasından sonra otaq temperaturunda 5 dəqiqə qala bilər.
Təmizlənmiş RNT molekullarının deqradasiyası
Təmizlənmiş RNT-nin keyfiyyəti nümunənin saxlanması, RNaz ilə çirklənməsi və əməliyyat kimi amillərlə bağlıdır.
Ümumi səbəblərin təhlili:
1.Toplanmış nümunələr vaxtında saxlanmayıb.
Təklif: Nümunə yığıldıqdan sonra vaxtında istifadə olunmazsa, onu dərhal -80 ℃ və ya maye azotda saxlayın.RNT molekullarının çıxarılması üçün mümkün olduqda təzə toplanmış nümunələrdən istifadə etməyə çalışın.
2.Toplanan nümunələr dəfələrlə dondurulur və əridilir.
Təklif: Nümunələrin toplanması və saxlanması zamanı təkrar dondurma və əritmədən (bir dəfədən çox olmamaqla) çəkinin, əks halda nuklein turşusunun məhsuldarlığı azalacaq.
3.RNase əməliyyat otağında tətbiq olundu və ya birdəfəlik əlcək, maska və s. taxılmadı.
Təklif: RNT molekullarının çıxarılması təcrübəsi ən yaxşı şəkildə ayrıca RNT əməliyyat otağında aparılır və təcrübə masası təcrübədən əvvəl təmizlənir.Təcrübə zamanı RNaz-ın tətbiqi nəticəsində RNT deqradasiyasının qarşısını almaq üçün birdəfəlik əlcəklər və maskalar taxın.
4. İstifadə zamanı reagent RNaz ilə çirklənmişdir.
Təklif: Əlaqədar təcrübələr üçün yeni Viral RNT İzolyasiya Kiti ilə əvəz edin.
5.Sentrifuqa borularının, pipet uclarının və s. RNase ilə çirklənməsi. Təklif: sentrifuqa borularının, pipet uclarının və pipetlərin hamısının RNazsız olduğuna əmin olun.
Təmizlənmiş RNT molekulları aşağı axın təcrübələrinə təsir etdi
Təmizləmə sütunu ilə təmizlənmiş RNT molekulları, həddindən artıq duz ionları və ya zülallar olduqda, aşağı axın təcrübələrinə təsir edəcək, məsələn: tərs transkripsiya, Northern Blot və s..
1.Elüt edilmiş RNT molekullarında duz ionları qalır.
Tövsiyə: Bufer viRW2-yə düzgün həcmdə susuz etanol əlavə olunduğundan əmin olun və əməliyyat təlimatlarında göstərilən düzgün sentrifuqa sürətinə uyğun olaraq təmizləmə sütununu iki dəfə yuyun; Əgər duz ionları hələ də qalırsa, siz təmizləyici sütuna viRW2 tamponunu əlavə edib otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxa bilərsiniz.Daha sonra duz ionlarının çirklənməsini maksimum dərəcədə aradan qaldırmaq üçün sentrifuqa edin
2.Elüt edilmiş RNT molekullarında qalan etanol var
Təklif: təmizləyici sütunların Bufer viRW2 ilə yuyulduğunu təsdiqlədikdən sonra, əməliyyat təlimatlarında göstərilən mərkəzdənqaçma sürətinə uyğun olaraq boş boru sentrifuqasını həyata keçirin.Əgər hələ də etanol qalırsa, qalan etanolu maksimum dərəcədə çıxarmaq üçün boş boru sentrifuqasından sonra otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxıla bilər.
Təlimat kitabçaları:
Viral RNT İzolyasiya Kiti Təlimat Kitabı
