Müştərilər üçün daha çox fayda yaratmaq şirkətimizin fəlsəfəsidir;müştəri artımı bizim super ən aşağı qiymətə Çin Qiagen Diaqnostik Rt-PCR Test Reagent Dəsti ilə eyni Keyfiyyətdə (ORF1ab) / CE ilə qrip a&B üçün iş təqibimizdir. Sizi istehsal bölməmizi mütləq yoxlamağınızı və uzun müddət ərzində öz evinizdə və xaricdəki istehlakçılarla xoş işgüzar əlaqələr yaratmağınızı gözləyirik.
Müştərilər üçün daha çox fayda yaratmaq şirkətimizin fəlsəfəsidir;müştəri artırmaq bizim üçün iş təqibidirÇin Qiagen, Multipleks reagent, 11 il ərzində, Biz indi 20-dən çox sərgidə iştirak etmişik, hər bir müştəridən yüksək qiymət alır.Şirkətimiz bu "ilk növbədə müştəriyə" həsr olunub və müştərilərə bizneslərini genişləndirməyə kömək etmək öhdəliyi götürüb ki, onlar Böyük Boss olsunlar!

Təsvirlər

Bu dəst RT-qPCR reaksiyaları üçün mədəni hüceyrə nümunələrindən RNT-ni tez buraxa bilən unikal lizis bufer sistemindən istifadə edir və bununla da vaxt aparan və zəhmətli RNT təmizləmə prosesini aradan qaldırır.RNT şablonu cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.Kit tərəfindən təmin edilən 5×Direct RT Mix və 2×Direct qPCR Mix-SYBR reagentləri real vaxtda kəmiyyət PCR nəticələrini tez və effektiv şəkildə əldə edə bilər.

5×Direct RT Mix və 2×Direct qPCR Mix-SYBR güclü inhibitor tolerantlığına malikdir və nümunələrin lizatından birbaşa RT-qPCR üçün şablon kimi istifadə oluna bilər.Bu dəstdə unikal RNT yüksək yaxınlıqlı Foregene əks transkriptaza və İsti D-Taq DNT polimeraza, dNTPs, MgCl var.₂, reaksiya buferi, PCR optimallaşdırıcısı və stabilizatoru.

Spesifikasiyalar

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

Kit komponentləri

Xüsusiyyətlər və üstünlüklər

■ Sadə və effektiv: Cell Direct RT texnologiyası ilə RNT nümunələri cəmi 7 dəqiqə ərzində əldə edilə bilər.

■ Nümunə tələbi kiçikdir, ən azı 10 hüceyrə sınaqdan keçirilə bilər.

■ Yüksək ötürmə qabiliyyəti: 384, 96, 24, 12, 6 quyulu lövhələrdə yetişdirilmiş hüceyrələrdə RNT-ni tez aşkar edə bilir.

■ DNT Eraser sərbəst buraxılmış genomları tez bir zamanda silə bilər, sonrakı eksperimental nəticələrə təsiri xeyli azalda bilər.

■ Optimallaşdırılmış RT və qPCR sistemi iki addımlı RT-PCR əks transkripsiyasını daha səmərəli və PCR-ni daha spesifik və RT-qPCR reaksiya inhibitorlarına qarşı daha davamlı edir.

Kit tətbiqi

Tətbiq sahəsi: mədəni hüceyrələr.

- Nümunə lizisi ilə buraxılan RNT: yalnız bu dəstin RT-qPCR şablonuna tətbiq edilir.

- Kit aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə edilə bilər: gen ifadə analizi, siRNA vasitəçiliyi ilə gen susdurucu təsirinin yoxlanılması, dərman skrininqi və s.

Diaqram

Saxlama və Raf ömrü

Bu dəstin I hissəsi 4℃ temperaturda saxlanmalıdır;II hissə -20 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır.

Foregene Protease Plus II 4 ℃ temperaturda saxlanılmalıdır, -20 ℃ temperaturda dondurulmamalıdır.

Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR qaranlıqda -20 ℃ temperaturda saxlanmalıdır;tez-tez istifadə olunarsa, qısamüddətli saxlama üçün 4℃ temperaturda da saxlanıla bilər (10 gün ərzində istifadə edin). Müştərilər üçün daha çox fayda yaratmaq şirkətimizin fəlsəfəsidir;müştəri artımı bizim super ən aşağı qiymətə Çin Qiagen Diaqnostik Rt-PCR Test Reagent Dəsti ilə eyni Keyfiyyətdə (ORF1ab) / CE ilə qrip a&B üçün iş təqibimizdir. Sizi istehsal bölməmizi mütləq yoxlamağınızı və uzun müddət ərzində öz evinizdə və xaricdəki istehlakçılarla xoş işgüzar əlaqələr yaratmağınızı gözləyirik.
Super Ən Aşağı QiymətÇin Qiagen, Multipleks reagent, 11 il ərzində, Biz indi 20-dən çox sərgidə iştirak etmişik, hər bir müştəridən yüksək qiymət alır.Şirkətimiz bu "ilk növbədə müştəriyə" həsr olunub və müştərilərə bizneslərini genişləndirməyə kömək etmək öhdəliyi götürüb ki, onlar Böyük Boss olsunlar!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -Təqman

Cat.No.DRT-01021/01022

≤ 1000.000 hüceyrədən istifadə edərək birbaşa RT-qPCR üçün

Məhsulun təqdimatı

Bu məhsul RT-qPCR reaksiyaları üçün yetişdirilmiş hüceyrə nümunələrindən RNT-ni tez bir zamanda buraxmaq üçün unikal lizis bufer sistemindən istifadə edir, vaxt aparan və zəhmət tələb edən RNT təmizləmə prosesini aradan qaldırır və tələb olunan RNT şablonunu əldə etmək üçün cəmi 7 dəqiqə, 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ilə PCR tərəfindən tez və effektiv real vaxtda effektiv nəticələr əldə edə bilir.

5× Direct RT Mix və 2× Direct qPCR Mix-Taqman güclü inhibitor dözümlülüyünə malikdir və şablon kimi ölçüləcək nümunənin lizatından istifadə edərək səmərəli geri çevrilmə və spesifik gücləndirmə həyata keçirə bilər.Reagent Foregene Reverse Transkriptaza, İsti D-Taq DNT Polimeraz, dNTPs, MgCl ehtiva edir.₂Nümunələri tez və asanlıqla aşkar etmək üçün lizis buferi ilə birlikdə istifadə oluna bilən və yüksək həssaslıq, spesifiklik və stabillik xüsusiyyətlərinə malik olan Reaction Bufer, PCR Optimizer və Stabilizer.

Məhsul xüsusiyyətləri

RNT nümunələrini əldə etmək üçün 7 dəqiqədən az vaxt tələb edən sadə, effektiv Cell Direct RT texnologiyası.

Nümunə tələbləri kiçikdir və təcrübə üçün minimum 10 kultura hüceyrədən istifadə edilə bilər.

384, 96, 24, 12 və 6 quyu plitələr kimi mədəni hüceyrələrin sürətli RNT alınması üçün yüksək məhsuldarlıq.

DNT Eraser sərbəst buraxılmış genomları tez bir zamanda aradan qaldırmağa qadirdir və sonrakı eksperimental nəticələrə təsiri xeyli azaldır.

Optimallaşdırılmış RT və qPCR sistemləri daha səmərəli əks transkripsiya, spesifiklik və daha güclü RT-qPCR reaksiya inhibitorlarına dözümlülük ilə iki mərhələli RT-PCR-ni təmin edir.

Kit tətbiqi

Tətbiq sahəsi: Kultura hüceyrələr.

Nümunə lizisi RNT-ni şərh etdi: yalnız iki addımlı RT-qPCR şablonu kimi istifadə olunur.

Dəstlər aşağıdakı məqsədlər üçün istifadə edilə bilər: gen tənzimləyici ifadə analizi, allel testi, dərman skrininqi və s.

Kit məhdudiyyətləri

Gücləndirilmiş fraqmentlər ≤ 300 bp.

Dəstlər hüceyrələrin təzə yetişdirilməsi üçün istifadə olunur.

Məhsulun keyfiyyətinə nəzarət

FOREGENE-nin Ümumi Keyfiyyət İdarəetmə Sisteminə əsasən, Cell Direct RT-qPCR seriyalı dəstlərin hər bir partiyası dəstlərin hər bir partiyasının keyfiyyətinin etibarlılığını və sabitliyini təmin etmək üçün ciddi şəkildə dəfələrlə sınaqdan keçirilir.

Kit məzmunu

*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ayrıca alına bilər, təfərrüatlar Əlavə 1-də verilmişdir (SƏHİFƏ 13).

Saxlama şəraiti

1. Göndərmə Şərtləri

Kitin <4 °C vəziyyətində olmasını təmin etmək üçün aşağı temperaturlu buz paketi qutusunun daşınması prosesi.

2. Saxlama şəraiti

I hissəni 4°C, II hissəni -20°C temperaturda saxlayın.

Foregene Protease Plus II 4°C temperaturda saxlanılmalıdır, -20°C-də dondurulmamalıdır.

Reagent 2× Direct qPCR Mix-Taqman -20°C-də və ya tez-tez istifadə edildikdə (10 gün ərzində) qısamüddətli istifadə üçün 4°C-də saxlanılır.

Kit komponenti haqqında məlumat

Tampon CL: Hüceyrə lizisi reaksiyaları üçün lazım olan mühiti təmin edir.

Tampon ST: Sonrakı RT-yə təsirlərin qarşısını almaq üçün lizatdakı aktiv maddəni dayandırır.

DNT Eraser: DNT təmizləyicisi, genomun çıxarılmasının sonrakı təcrübələrə təsiri.

5× Direct RT Mix: Yüksək RNT yaxınlığı Foregene Reverse Transkriptaza, RNaz İnhibitoru, dNTP-lər, stabilizatorlar, gücləndiricilər, optimallaşdırıcılar və optimal uyğunlaşma üçün əks transkripsiya primerləri (Random Primer, Oligo(dT)) ehtiva edir.₁₈Primer).

Foregene Protease Plus II: Lizis tamponu kontekstində hüceyrələr nuklein turşularını buraxmaq üçün parçalanır.

2× Direct qPCR Mix-Taqman: Bu reagent isti D-Taq DNT Polimeraz, dNTPs, MgCl ehtiva edir.₂, reaksiya buferi, PCR optimallaşdırıcısı və stabilizator.

20× ROX Referans Boyası: Ümumiyyətlə ABI, Stratagene və digər şirkətlərin Real Time PCR gücləndirmə alətlərində istifadə olunur, PCR dozası səhvləri nəticəsində yaranan PCR boruları və borular arasındakı fərqi tənzimləmək üçün istifadə olunur.Müxtəlif alətlər üçün tələb olunan 20× ROX Referans Boya konsentrasiyası fərqlidir və istifadəçi onu alətin tövsiyə olunan konsentrasiyasına uyğun olaraq əlavə edə bilər.

RNazsız ddH₂O: İki mərhələli RT-qPCR reaksiyaları üçün RNazsız sterilizə edilmiş ultra təmiz su.

Ehtiyat tədbirləri:(Dəsti istifadə etməzdən əvvəl ehtiyat tədbirlərini diqqətlə oxuyun.)

Nümunələr arasında çarpaz çirklənmənin qarşısını almaq üçün təcrübənin iş üsuluna diqqət yetirin.

RNase çirklənməsinin və RNT deqradasiyasının qarşısını almaq üçün eksperimental mühitin və qabların təmizliyinə diqqət yetirin.

Təzə və ya yaxşı qorunan hüceyrə nümunələri götürün və heç vaxt təkrar dondurulmuş əridilmiş hüceyrə nümunələrindən istifadə etməyin.

5× Direct qPCR Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman təkrar dondurma-ərimədən qaçmalıdır, əks halda bu, əks transkripsiyaya və PCR səmərəliliyinə təsir edəcək.

Hazırlıqrasionlarəvvələməliyyat

Bu dəsti istifadə etməzdən əvvəl təlimatları diqqətlə oxumağınızdan əmin olun.Cell Direct RT-qPCR Dəsti sadə, rahat və sürətli işləyir və təlimatlar bütün dəst və ondan düzgün istifadə edilməsi haqqında tam məlumat verir.Zəhmət olmasa istifadə etməzdən əvvəl lazımi eksperimental materialları və avadanlıqları hazırlayın.

Eksperimental materiallar və avadanlıqlar

◆ Mədəniyyət hüceyrələri.

◆ 1,5 ml və ya 2 ml, RNase-/DNase-Free sentrifuqa borusu, RNase-/DNase-Free uc, 0,2 ml steril qPCR borusu.

◆ qPCR maşını, pipet, masa üstü sentrifuqa (≥13,400×g) (eksperimental ehtiyaclardan asılı olaraq) və s.

Təhlükəsizlik

◆ Bu məhsul yalnız elmi tədqiqat məqsədləri üçündür, lütfən onu əczaçılıq, klinik, qida və kosmetik məqsədlər üçün istifadə etməyin.

◆ Kimyəvi maddələrdən istifadə edərkən müvafiq laboratoriya paltarları, əlcəklər, qoruyucu eynəklər və s. taxın.

Əməliyyatbələdçilər

Hüceyrə lizisi sistemləri, RT sistemləri və qPCR reaksiya məhlulu əlavə paketləri Əlavə 1-də (SƏHİFƏ 13) ətraflı məlumat üçün ayrıca alına bilər.

Əməliyyat təlimatı

A: Nümunə RNT buraxılması

1.Hüceyrələr əvvəlcədən işlənmişdir: Hüceyrə mədəniyyəti boşqabını soyuq PBS ilə yuyun, sonra hüceyrələri lize edin (10-10)⁶), 10⁶ hüceyrələrin miqdarından daha çox, RNT çıxarılması və təmizlənməsi üçün Hüceyrəni bir RNT İzolyasiya Kitini (DE-03111) və ya Heyvanların Ümumi RNT İzolyasiya Kitini (DE-03011) çıxartmaq tövsiyə olunur.

1.1.Yapışqan hüceyrələr (nümunə olaraq 24 quyu boşqab)

1.1.1.Hər quyudakı hüceyrələrin sayını təyin edin, hüceyrələrin sayının 1 × 10 olduğunu müəyyənləşdirin⁵, və mədəniyyət qabından mədəniyyət mühitini çıxarmaq üçün pipetdən istifadə edin.

1.1.2.Hər quyuya 200 μl əvvəlcədən soyudulmuş 1 × PBS əlavə edin.Dəfələrlə pipetləməyin və PBS-ni quyulardan çıxarmayın.Plitəni əyin və mümkün qədər çox PBS çıxarın.2-ci addıma keçin.

1.1.3.Fərqli hüceyrə mədəniyyəti qabına və ya hüceyrə mədəniyyəti qabında 1-1 istinad nömrəsi cədvəlinə hüceyrə yuyulması üçün əvvəlcədən soyudulmuş 1 × PBS əlavə edildi.

Cədvəl 1-1: Müxtəlif sayda hüceyrələr üçün PBS dozası

Qeyd:Hüceyrələrin möhkəm yapışmasını təmin etmək,yuyarkən çox sayda hüceyrə itkisinin qarşısı alınır.

1.2.Süspansiyon hüceyrələri və ya məsaməli olmayan lövhələrdə yetişdirilmiş yapışqan hüceyrələr

1.2.1.Qeyri-çox quyu plitələrində yetişdirilmiş yapışqan hüceyrələr (asma hüceyrələri növbəti addım 1.2.2-dən başlayır), normal hüceyrə toplama üsuluna uyğun olaraq hüceyrələri toplayır və ayırır və mədəniyyət boşqabına və ya sentrifuqa borusuna yerləşdirir;tripsinizasiya istifadə olunarsa, hüceyrələri toplamaq və qalıq tripsini çıxarmaq üçün sentrifuqa tələb olunur, hüceyrələri dağıtmaq üçün PBS resuspended hüceyrələri ayrı-ayrı hüceyrələrə əlavə edilir.

1.2.2.Hüceyrələrin sayı hesablandıqdan sonra hüceyrələr 1×10 bölünür⁵ biri boruları santrifüj etmək, 10 dəqiqə ərzində 1000 × g-də sentrifuqa edərək hüceyrələri toplamaq.

1.2.3.Santrifüj borusuna 200 μl PBS əlavə edin, təkrar pipetləməyin və birbaşa PBS-ni aspire edin.2-ci addıma keçin. (Əgər çökdürmək çətin olarsa və hüceyrələr yenidən suspenziya edilibsə, supernatant atıldıqdan 10 dəqiqə sonra 1000×g sentrifuqa edilə bilər, hüceyrə qranul 2-ci addıma keçin)

2.Hüceyrə lizisi: Aşağıdakı cədvəl 1-2 hazırlanmış lizis sisteminə uyğun olaraq temperaturu otaq temperaturuna bərabərləşdirilmiş Bufer CL-ni, DNT Eraser və Foregene Protease Plus II-ni çıxarın: (Lizis məhlulu istifadəyə hazırdır).

Cədvəl 1-2: dekolte sistemin hazırlanması (Qeyd: buz üzərində hazırlıqda)

3.( Nümunə olaraq 24 quyu boşqab) Hər bir quyuya 200 μl hüceyrə lizisi master qarışığını pipetlə çəkin, 5-10 dəfə təkrar üfürün, otaq temperaturunda (20-25 ℃) 5 dəqiqə inkubasiya edin.

Qeyd:Baloncukların əmələ gəlməsinin qarşısını almaq üçün lütfən, pipetləmə üçün pipetka miqyası 200μl və ya daha az ölçülərə uyğunlaşdırıldıqda.Lizisdən sonra hüceyrələr buludlu görünə bilər, bu normaldır.

4.(nümunə olaraq 24 quyu boşqab) mayeyə 20 μl Bufer ST əlavə edilir (Cədvəl 1-3-də göstərilən miqdarda müxtəlif lizis sistemləri Bufer ST əlavə edilir), 5-10 dəfə təkrar pipetləmə, otaq temperaturunda (20-25 ℃) 2 dəqiqə inkubasiya edilmişdir.

Qeyd:Pipetin ucu lizatın əlavə olunmasını təmin edərək səthin altına yerləşdirildi,qabarcıqların əmələ gəlməsinin qarşısını almaq üçün, lütfən, pipetləmə şkalasını 200 μl və ya daha azına uyğunlaşdırarkən edin.

Cədvəl 1-3:Bufer ST əlavə edin

5. Lizat sonrakı RT-qPCR təcrübələri üçün istifadə olunur.Sonrakı təcrübələri vaxtında həyata keçirmək mümkün olmadıqda, lütfən, onu 2 saatdan çox olmayan buz üzərində saxlayın və -20 ℃ və ya -80 ℃ (üç aydan çox olmayan) temperaturda saxlayın.

B: RT sisteminin hazırlanması

1. 5 × Direct RT Mixi çıxarın və buz vannasına qoyun, təbii şəkildə əriməsinə icazə verin və sonradan istifadə etmək üçün yumşaq qarışdırın;RNase-Free ddH2O çıxarın və əridin və sonra istifadə etmək üçün buz banyosuna qoyun.Aşağıdakı cədvəl 2-1-ə uyğun olaraq buz üzərində reaksiya sistemini hazırlayın.

Cədvəl 2-1: RT reaksiya sisteminin hazırlanması

2.Sistem tərtibi tamamlandıqdan sonra, aşağıdakı cədvəldə 2-2 reaksiya şərtləri RT reaksiyasında zərifcə qarışdırın və qısa müddətə sentrifuqa edin.

Cədvəl 2-2: RT Reaksiya vəziyyətinin qəbulu

3. Reaksiya başa çatdıqdan sonra, reaksiya məhsulu qPCR üçün birbaşa buzun üzərinə qoyuldu, lütfən, uzunmüddətli saxlama -20 ℃ və ya -80 ℃ qoyun.

Qeyd: Təmizlənməmiş şablonun istifadəsi səbəbindən əks transkripsiya məhsulunda ağ çöküntülər görünə bilər.Bu normal bir fenomendir.Sonrakı təcrübələr üçün dərhal supernatantı sentrifuqa edin.

Nəticədə RT reaksiya məhlulu növbəti Step Real Time PCR reaksiya sistemlərinə əlavə edilir, reaksiya sisteminin 10-30%-i arasında dəyişən miqdarların əlavə edilməsi tövsiyə olunur.

C: qPCR reaksiya sisteminin hazırlanması

1. Reaksiya sistemini hazırlamaq üçün aşağıdakı cədvəl 3-1-ə uyğun olaraq addım cDNA şablonunda B-nin müvafiq miqdarı hazırlanmışdır.

Qeyd: cDNA şablonunun miqdarı qPCR sisteminin 10-30%-ni təşkil edir.Məsələn, 20μl qPCR sistemində 2-6 μl liziz tamponu əlavə edin, lakin 6 μl-dən çox olmamalıdır.

2. qPCR reaksiyası üçün optimal qPCR şərtləri (Tovlama temperaturu və s.) (Cədvəl 3-2-də verilmiş reaksiya şərtləri).

Qeyd: Daha yaxşı nəticələr əldə etmək üçün qPCR reaksiyaları üçün optimallaşdırılmış şərtlərdən istifadə etməyə çalışın.

Cədvəl 3-1: PCR reaksiya sisteminin hazırlanması

1*: Primer reaksiya performansı zəif olduqda, primer konsentrasiyası 50-900 nM aralığında tənzimlənə bilər.

Qeyd: qPCR sistemi eksperimental ehtiyaclara və flüoresan dövran modelinə uyğun olaraq tənzimlənə bilər.50-də qPCR üçünμl sistemində reagentin dozasını 20-yə uyğun olaraq mütənasib olaraq tənzimləyinμl sistemi.

2*: Flüoresan kəmiyyət termal siklatoruna uyğun olaraq ROX Referans Boyasının müvafiq yekun konsentrasiyasını seçin.Ümumi flüoresan kəmiyyət dövranları üçün ən uyğun ROX Referans Boya konsentrasiyaları aşağıdakı cədvəldə göstərilmişdir:

Cədvəl 3-2: qPCR reaksiya şərtləri verilmişdir

Qeyd: Ən yaxşı qPCR effektini əldə etmək üçün gradient PCR müxtəlif şablonlar və müxtəlif primerlər üçün reaksiya şəraitini optimallaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər.PZR reaksiya şərtləri flüoresan analizatordan, şablondan, primerdən və s. asılı olaraq dəyişir. Xüsusi əməliyyatda optimal reaksiya şəraiti flüoresan kəmiyyət termal siklatorunun xüsusi şərtlərinə, şablon növünə, maraq kəsb edən fraqmentin ölçüsünə, gücləndirilmiş fraqmentin əsas ardıcıllığına və GC tərkibinə və temperatur primerlərinin uzunluğuna, o cümlədən reaksiya müddətinə və s.

Real Time PCR primer dizayn prinsipləri

İrəli Astar və Ters Astar

Real Time PCR üçün primer dizaynı çox vacibdir.Primerlər PCR gücləndirilməsinin spesifikliyi və səmərəliliyi ilə bağlıdır və aşağıdakı prinsiplərə istinad edərək tərtib edilə bilər:

◆ Astarın uzunluğu: 18-30bp.

◆ GC tərkibi: 40-60%.

◆ Tm dəyəri: Primer 5 kimi primer dizayn proqramı primerin Tm dəyərini verə bilər.Yuxarı və aşağı axın primerlərinin Tm dəyərləri mümkün qədər yaxın olmalıdır.Tm hesablama düsturu da istifadə edilə bilər: Tm = 4 °C (G + C) + 2 ° C (A + T).PCR həyata keçirərkən, 5 °C primer Tm dəyərindən aşağı olan temperatur ümumiyyətlə yumşalma temperaturu kimi seçilir (bağlama temperaturunda müvafiq artım PZR reaksiyasının spesifikliyini artıra bilər).

◆ Primerlər və PCR məhsulları:

◆ Dizayn primerinin PCR gücləndirmə məhsulunun uzunluğu üstünlük olaraq 100-150bp-dir.

◆ Şablonun ikinci dərəcəli struktur sahəsində dizayn astarlarından mümkün qədər çəkinmək lazımdır.

◆ Yuxarı və aşağı axın primerlərinin 3′ ucları arasında 2 və ya daha çox tamamlayıcı əsasın əmələ gəlməsindən çəkinin.

◆ Primer 3′ terminal bazası əlavə 3 ardıcıl G və ya C ilə mövcud ola bilməz.

◆ Primerlərin özləri bir-birini tamamlayan strukturlara malik ola bilməzlər, əks halda PCR gücləndirilməsinə təsir edən saç sancağı strukturu yaranacaq.

◆ ATCG primer ardıcıllığında mümkün qədər bərabər paylanmalı və 3′ terminal bazasından T kimi çəkinmək lazımdır.

Əlavə1:Cell DirectRT-qPCR Komponent dəstit əlavə paketi

1.Hüceyrə lizisi məhlulu