Bukkal Swab/FTA Kartı DNT İzolyasiya Kiti Bukkal Swablardan Genomik DNT Ekstraksiya və ya Təmizləmə Dəsti
Kit təsviri:
Bukkal tampon/FTA Kart nümunələrindən yüksək keyfiyyətli genomik DNT-ni tez təmizləyin.
◮RNaz ilə çirklənmə yoxdur:Dəst tərəfindən təmin edilən Yalnız DNT Sütunu, laboratoriyanın ekzogen RNase ilə çirklənməsinin qarşısını alaraq, təcrübə zamanı RNaz əlavə etmədən RNT-ni genomik DNT-dən çıxarmağa imkan verir.
◮Sürətli sürət:Foregene Protease oxşar proteazlardan daha yüksək aktivliyə malikdir və toxuma nümunələrini tez həzm edir;əməliyyat sadədir və genomik DNT çıxarılması əməliyyatı 20-80 dəqiqə ərzində tamamlana bilər.
◮Rahat:Mərkəzdənqaçma otaq temperaturunda aparılır və 4°C aşağı temperaturda sentrifuqaya və ya DNT-nin etanolla çökməsinə ehtiyac yoxdur.
◮Təhlükəsizlik:Üzvi reagentlərin çıxarılması tələb olunmur.
◮Yüksək keyfiyyət:Çıxarılan genomik DNT böyük fraqmentlərə malikdir, RNT yoxdur, RNaz yoxdur və müxtəlif eksperimentlərin tələblərinə cavab verə bilən son dərəcə aşağı ion tərkiblidir.
◮Mikroelüsyon sistemi:Aşağı axının aşkarlanması və ya sınaq üçün əlverişli olan genomik DNT konsentrasiyasını artıra bilər.
Təsvir
Bu dəst bukkal tamponlardan və FTA Kartından (qan ləkələri) yüksək konsentrasiyalı genomik DNT əldə etmək üçün səmərəli və sürətli üsul təqdim edir.Şirkətimizdən istifadə etməklə's unikal DNT-dən ibarət olan silisium membran spin sütunu və formul, Foregene Protease ilə birlikdə yüksək konsentrasiyalı, yüksək keyfiyyətli genomik DNT-ni 80 dəqiqə ərzində çıxarmaq olar.Xüsusi hazırlanmış kiçik təmizləmə sütunu genomik DNT-ni bağlayır və DNT az miqdarda (15μl) əldə edilmiş genomik DNT-nin konsentrasiyasını artırmaq üçün elüsyon sistemi, aşağı axının aşkarlanması və ya sınaq üçün əlverişlidir.Dəst eyni anda bir və ya bir neçə nümunəni emal edə bilər və təmizlənmə prosesi fenol, xloroform kimi üzvi maddələrin çıxarılmasını və izopropanol və ya etanol çöküntüsünün vaxt aparmasını tələb etmir və əməliyyat sadədir və vaxta qənaət edir.
Spesifikasiyalar
50 Hazırlıq
Kit komponentləri
| Bufer ST1 |
| Bufer ST2 |
| Xətti Akrilamid |
| Bufer PW |
| Bufer WB |
| Bufer EB |
| Foregene Proteaz |
| Yalnız DNT Sütunu |
| Təlimatlar |
Xüsusiyyətlər və üstünlüklər
-RNase ilə çirklənmə yoxdur: Dəst tərəfindən təmin edilən Yalnız DNT Sütunu, laboratoriyanın ekzogen RNaz ilə çirklənməsinin qarşısını alaraq, təcrübə zamanı RNaz əlavə etmədən genomik DNT-dən RNT-ni çıxarmağa imkan verir.
- Sürətli sürət: Foregene Protease oxşar proteazlardan daha yüksək aktivliyə malikdir, nümunələri tez həzm edir;sadə əməliyyat.
-Rahat: Santrifüj otaq temperaturunda aparılır və 4°C aşağı temperaturda sentrifuqaya və ya DNT-nin etanolla çökməsinə ehtiyac yoxdur.
-Təhlükəsizlik: Üzvi reagentin çıxarılması tələb olunmur.
-Yüksək keyfiyyət: Çıxarılan genomik DNT böyük fraqmentlərə malikdir, RNT yoxdur, RNaz yoxdur və müxtəlif təcrübələrin tələblərinə cavab verə bilən son dərəcə aşağı ion tərkibi var.
-Mikro-elüsyon sistemi: Aşağı axının aşkarlanması və ya sınaq üçün əlverişli olan genomik DNT konsentrasiyasını artıra bilər.
Kit tətbiqi
Aşağıdakı nümunələrdən genomik DNT-nin təmizlənməsi üçün uyğundur: bukkal tamponlar, FTA Kartı (qan ləkələri).
Saxlama və Raf ömrü
-Bu dəst quru şəraitdə otaq temperaturunda (15-25°C) 12 ay saxlanıla bilər;daha uzun müddət saxlamaq lazımdırsa, onu 2-8°C temperaturda saxlamaq olar.
Qeyd: Aşağı temperaturda saxlanılırsa, məhlul çöküntüyə meyllidir.İstifadə etməzdən əvvəl məhlulu bir müddət otaq temperaturunda dəstdə yerləşdirin.Lazım gələrsə, çöküntünü həll etmək üçün onu 37°C su banyosunda 10 dəqiqə əvvəlcədən qızdırın və istifadə etməzdən əvvəl qarışdırın.
-Foregene Protease məhlulu unikal formulaya malikdir, otaq temperaturunda uzun müddət (3 ay) saxlandıqda aktivdir;onun aktivliyi və stabilliyi 4°C-də saxlandıqda daha yaxşı olacaq, ona görə də onu 4°C-də saxlamaq məsləhətdir, -20°C-də saxlamamağı unutmayın.
Təmizləmə sütunu tıxanmışdır
Bu dəstdə genomik DNT ekstraksiya əməliyyatında təmizləyici sütun sentrifuqasiya mərhələsi olmadan nümunənin fermentativ lizis qarışığına birbaşa adsorbsiya edilir və təmizlənmə sütunu natamam enzimləşmə və nümunənin yüksək özlülüyünə görə bloklana bilər.
Aşağıdakı mümkün səbəblər aşağıdakılardır:
1. Toxuma nümunələrinin natamam enzimatik həzmi.
Tövsiyə: Foregene Protease nümunəsinin emal müddəti müvafiq olaraq uzadıla bilər və ya supernatant 5 dəqiqə ərzində 12,000 rpm (~13,400 × g) sentrifuqadan sonra götürülə bilər.
2. Toxuma nümunələrinin və ya böyük toxumaların həddindən artıq istifadəsi.
Tövsiyə: Yaxşı olar ki, nümunədə 1 Buccal tamponunu keçməyin;nümunə çox böyükdürsə, müvafiq olaraq Buffer ST1, Foregene Protease, bufer ST2 dozasını artırın.
3. Nümunənin özlülüyü çox yüksəkdir.
Tövsiyə: Nümunələr genomik DNT ekstraksiyasından əvvəl 10 mM Tris-HCl ilə müvafiq şəkildə seyreltilə bilər.
4. Qan kartının fraqmentləri soruldu.
Tövsiyə: Qan ləkəsinin (FTA Kartı) genomik çıxarılmasının 6-cı addımının keçici sentrifuqalama vaxtı müvafiq şəkildə uzadıla bilər.
Aşağı məhsuldarlıq və ya DNT yoxdur
Çox vaxt genomik DNT məhsuldarlığına təsir edən müxtəlif amillər, o cümlədən nümunənin mənşəyi, nümunənin saxlanma şəraiti, nümunənin hazırlanması, manipulyasiya və s.
Ekstraksiya zamanı genomik DNT əldə edilə bilməz
Mümkün səbəblər aşağıdakılardır:
1. Nümunələrin düzgün saxlanmaması və ya çox uzun müddət saxlanması genomik DNT deqradasiyasına gətirib çıxarır.
Tövsiyə: Ağızdan tamponlar təzə nümunə götürülməlidir və genomik DNT ekstraksiya əməliyyatları üçün konservləşdirilmiş tamponlardan istifadə etmək məsləhət görülmür;qan ləkəsi nümunələri keyfiyyətin uyğun olmasını təmin etməlidir və saxlama müddəti çox uzun olmamalıdır.
2. Toxumanın çox az istifadəsi müvafiq genomik DNT-nin çıxarılması ilə nəticələnə bilməz.
Tövsiyə: Əməliyyat təlimatında bukkal tampon nümunəsi götürmə təlimatlarına əməl edin və genomik DNT ekstraksiyası üçün kifayət qədər hüceyrənin ağız tamponuna əlavə oluna bilməsi üçün mümkün qədər çox silin;qan ləkəsi nümunəsinin çıxarılması üçün qan ləkəsinin kəsmə sahəsi müvafiq olaraq artırıla bilər.
3. Foregene Proteaz düzgün olmayan şəkildə qorunub saxlanılır, nəticədə onun aktivliyi azalır və ya inaktivləşir.
Tövsiyə: Foregene Proteazın saxlanma şərtlərini təsdiqləyin və ya enzimatik reaksiya üçün onu yeni Foregene Proteaz ilə əvəz edin.
4. Kitin düzgün saxlanmaması və ya saxlama müddəti çox uzundur, nəticədə dəstin bəzi komponentləri sıradan çıxır.
Tövsiyə: Müvafiq prosedurlar üçün yeni Buccal tampon DNT izolyasiya dəsti alın.
5. Bufer WB mütləq etanol əlavə etmir.
Tövsiyə: WB tamponunun mütləq etanolun düzgün həcmini əlavə etdiyini təsdiqləyin.
6. Silikon filmə eluent düzgün əlavə olunmayıb.
Tövsiyə: Silikon membranın ortasına 65 °C əvvəlcədən isidilmiş eluent damcıları əlavə edin və elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.
Aşağı məhsuldar genomik DNT təcrid edilmişdir
Aşağıdakı mümkün səbəblər aşağıdakılardır:
1. Nümunələrin düzgün saxlanmaması və ya çox uzun müddət saxlanması genomik DNT deqradasiyasına gətirib çıxarır.
Tövsiyə: Ağızdan alınan tamponlar tercihen təzə alınmışdır və konservləşdirilmiş tamponlar genomik DNT ekstraktı üçün istifadə edilməməlidir.
2. Əgər toxuma nümunəsinin miqdarı çox azdırsa, ekstraksiya edilmiş genomik DNT tərkibi daha az olacaq.
Tövsiyə: Genomik DNT ekstraksiyası üçün ağız tamponuna kifayət qədər hüceyrə əlavə oluna bilməsi üçün əməliyyat təlimatındakı ağızdan tampon nümunəsi götürmə təlimatlarına əməl edin, mümkün qədər çox silin.
3. Foregene Proteaz düzgün olmayan şəkildə qorunub saxlanılır, nəticədə onun aktivliyi azalır və ya inaktivləşir.
Tövsiyə: Foregene Proteazın saxlanma şərtlərini təsdiqləyin və ya enzimatik reaksiya üçün onu yeni Foregene Proteaz ilə əvəz edin.
4. Eluent problemləri.
Tövsiyə: Elüsyon üçün Bufer EB istifadə edin;ddH istifadə edirsinizsə2O və ya digər elüentlər, eluatın pH-nın 7,0-8,5 arasında olduğunu təsdiqləyin.
5. Eluat damla damla düzgün əlavə olunmur.
Tövsiyə: Silikon membranın ortasına eluent damcıları əlavə edin və elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.
6. Elüsyon mayesi çox az toplanır.
Tövsiyə: Genomik DNT elüsyonu üçün təlimatlarda tələb olunduğu kimi, ən azı 15 μl-dən az olmayan eluentdən istifadə edin.
Təcrid olunmuş genomik DNT-nin aşağı təmizliyi
Aşağı genomik DNT təmizliyi aşağı axın təcrübələrinin uğursuzluğuna və ya qeyri-qənaətbəxş nəticələrinə səbəb ola bilər, məsələn: fermentləri kəsmək mümkün deyil, PCR maraq doğuran gen fraqmentini əldə edə bilməz və s.
Mümkün səbəblər aşağıdakılardır:
1. Heteroprotein çirklənməsi, RNT çirklənməsi.
Təhlil: Təmizləmə sütunu Buffer PW ilə yuyulmayıb;Buffer PW yuma təmizləyici sütunu düzgün mərkəzdənqaçma sürətindən istifadə edərək yuyulmadı.
Tövsiyə: Etanol əlavə etməzdən əvvəl supernatantda çöküntü olmadığından əmin olun;təmizləyici sütunu təlimatlara uyğun olaraq yumağınızdan əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.
2. Çirkli ionların çirklənməsi.
Təhlil: Bufer WB yuma təmizləmə sütunu buraxıldı və ya yalnız bir dəfə yuyuldu, nəticədə qalıq ion çirklənməsi yarandı.
Tövsiyə: Qalıq ionları mümkün qədər çıxarmaq üçün Buffer WB-ni 2 dəfə yuyun.
3. RNT fermentinin çirklənməsi.
Təhlil: Xarici RNases buferə əlavə edildi;Bufer PW yuyulması əməliyyatı səhv idi, nəticədə RNaz qalıqları yarandı və bu, in vitro transkripsiya kimi aşağı axın RNT eksperimental əməliyyatlarına təsir etdi.
Tövsiyə: Foregene seriyalı nuklein turşusu təcrid dəstləri əlavə RNase əlavə etmədən RNT-ni çıxara bilər, beləliklə, bukkal Swab/FTA Kartı DNT İzolyasiya Kitinə RNase əlavə etmək lazım deyil;Bufer PW yuma təmizləyici sütun üçün təlimatlara əməl etməyinizə əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.
4. Etanol qalığı.
Təhlil: Bufer WB təmizləyici sütunu yuduqdan sonra boş boru sentrifuqasını həyata keçirmədi.
Tövsiyə: Təlimatlara uyğun olaraq düzgün boş borunun sentrifuqa əməliyyatını yerinə yetirin.
5. Digər çirkləri çirkləndirmə.
Təhlil: Saxlanmış nümunələr və ya xüsusi nümunələr əvvəlcədən müalicə olunmur.
Tövsiyə: Təlimatlara uyğun olaraq nümunəni hərtərəfli əvvəlcədən müalicə edin.
