A260/A230 nisbətinin aşağı olması adətən 230nm-də maksimum udma dalğa uzunluğuna malik çirklərdən qaynaqlanır.Gəlin görək bu çirklərə nə daxildir:

• Ümumi çirkləndiricilər	Absorbsiya dalğa uzunluğu	Nisbət effekti
  Zülal	~230nm və 280nm	A-nın eyni vaxtda azalması260/A 280və A260/A 280nisbətləri
  Quanidin duzu	220-240 nm	A-nı azaldın260/A 280nisbət
  Fenol	~270nm	-
  Trizol	~230nm və 270nm	A-nı azaldın260/A 280nisbət
  EDTA	~230nm	A-nı azaldın260/A 280nisbət
  Etanol	230-240 nm	A-nı azaldın260/A 280nisbət

 
 
 
Ümumi çirkləndiricilərin udma dalğa uzunluğu və kontrast dəyəri

Proteinlə çirklənmə
Zülalların çirklənməsi nuklein turşusunun çıxarılması prosesində ən çox yayılmış çirklənmə kimi qəbul edilə bilər.Zülal yuxarı sulu faza ilə aşağı faza arasında mövcuddurüzvifaza .Çirklənmə A260/A280 və A260/A230 nisbətini eyni vaxtda azaldacaq və A260/A230 nisbəti A260/A280 nisbətindən daha açıq şəkildə dəyişəcək.
Sonrakı dövrdəəks transkripsiyaor qPCR reaksiyaları, protein qalıqları ferment funksiyasını maneə törədə və ya müdaxilə edə bilər.Zülalın çirklənməsinin qarşısını almağın ən yaxşı yolu, supernatantı aspirasiya edərkən “çoxdan daha az, dəfələrlə az miqdarda” prinsipini yadda saxlamaqdır.

2. Guanidinium çirklənməsi
hidroxlorid (GuHCl) və guanidin tiosiyanat (GTC) zülalların denatürasiyası təsirinə malikdir, bu da nuklein turşusunun çıxarılması prosesi zamanı hüceyrə membranlarını tez məhv edə bilər, zülalın denatürasiyasına və çökməsinə səbəb olur.GuHCl və GTC-nin udma dalğa uzunluğu 220-240 nm arasındadır vəqalıq guanidinium duzu A260/A230 nisbətini azaldacaq.Baxmayaraq ki, qalıq guanidinium duzu nisbəti azaldır.aşağı axın təcrübələrinə təsir əslində əhəmiyyətsizdir.

3. Trizol ilə çirklənmə
Trizolun əsas komponenti fenoldur.Fenolun əsas funksiyası hüceyrələrin parçalanması və hüceyrələrdə zülalların və nuklein turşusu maddələrinin sərbəst buraxılmasıdır.Fenol zülalları effektiv şəkildə denatürasiya edə bilsə də, RNaz aktivliyini tamamilə inhibə edə bilməz.Buna görə də, endogen və ekzogen RNaz-ı inhibə etmək üçün TRIzol-a 8-hidroksixinolin, guanidin izotiosiyanat, β-merkaptoetanol və s. əlavə edilir.
Hüceyrə RNT-ni çıxararkən Trizol hüceyrələri sürətlə parçalaya və hüceyrələrdən ayrılan nukleazanı inhibə edə bilər və qalıq Trizol A260/A230 nisbətini əhəmiyyətli dərəcədə azaldacaq.
Emal üsulu: Mərkəzdənqaçma zamanı qeyd etmək lazımdır ki, Trizolun tərkibindəki fenol 4° və otaq temperaturu şəraitində su fazasında asanlıqla həll olunur.

4. Etanol qalığı
Etanol, DNT-yə bağlana bilən duz ionlarını həll edərkən DNT-ni çökdürmək üçün son prosesdə istifadə olunur.Ən yüksək udma dalğasıudma piketanol da 230-240 nm-dir ki, bu dahəmçinin A260/A230 nisbətini azaldacaq.
Etanol qalıqlarının qarşısını almaq üsulu son elüsyon zamanı iki dəfə təkrarlana bilərduman qapağıelüsyon üçün tampon əlavə etməzdən əvvəl etanolun tam buxarlanmasına imkan vermək üçün iki dəqiqə saxlayın.
Ancaq bilmək lazımdır ki, nisbət yalnız RNT keyfiyyətinin qiymətləndirmə göstəricisidir.Əgər yuxarıda qeyd olunan əməliyyatlar ciddi şəkildə tənzimlənərsə, nisbət və standart diapazon arasındakı kənarlaşma aşağı axın təcrübələrinə böyük təsir göstərməyəcəkdir.
Əlaqədar məhsullar:
Animal Total RNT İzolyasiya dəsti
Bitki Ümumi RNT İzolyasiya dəsti
Hüceyrə Toplam RNT İzolyasiya dəsti
Bitki Total RNT İzolyasiya dəsti Plus