Tez-tez verilən suallarAnimal Total RNT İzolyasiya dəsti

Qarşılaşa biləcəyiniz problemlərin aşağıdakı təhliliheyvan toxuması/hüceyrə RNT çıxarılması will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNT çıxarılmır və ya RNT məhsuldarlığı aşağıdır

Tez-tez bərpa səmərəliliyinə təsir edən müxtəlif amillər var, məsələn: toxuma nümunəsinin RNT tərkibi, əməliyyat üsulu, elüsyonun həcmi və s.

1. Əməliyyat zamanı buz vannası və ya kriogenik (4 °C) sentrifuqalama aparıldı.

Tövsiyə: Bütün proses boyu otaq temperaturunda (15-25°C) işləyin, aşağı temperaturda buz vannası və sentrifuqa etməyin.

2. Nümunənin düzgün saxlanmaması və ya nümunənin həddindən artıq saxlanması.

Tövsiyə: Nümunələri -80 °C-də saxlayın və ya maye azotda dondurun və təkrar dondurma-ərimə istifadəsindən çəkinin;RNT çıxarılması üçün təzə toxuma və ya mədəni hüceyrələrdən istifadə etməyə çalışın.

3. Qeyri-kafi nümunə lizisi.

Tövsiyə: Toxumanı homogenləşdirərkən, toxumanın kifayət qədər homojenləşdiyinə və RNT-nin sərbəst buraxılmasını izah etmək üçün toxuma hüceyrələrinin kifayət qədər bölünməsinə əmin olun.

4. Eluent düzgün əlavə olunmayıb.

Tövsiyə: RNase-Free ddH olduğunu təsdiq edin₂O, təmizləyici sütun membranının ortasına damcı-damcı əlavə edilir.

5. Bufer RL2 və ya RW2 tamponuna mütləq etanolun düzgün həcmi əlavə edilməmişdir.

Tövsiyə: Təlimatlara əməl edin, RL2 tamponuna və RW2 tamponuna düzgün həcmdə mütləq etanol əlavə edin və dəsti istifadə etməzdən əvvəl yaxşıca qarışdırın.

6. Toxuma nümunəsinin dozası uyğun deyil.

Tövsiyə: 10-20 mq toxuma və ya (1-5) × 10 istifadə edin⁶Həddindən artıq toxuma istifadəsi RNT ekstraksiyasının azalması ilə nəticələnə biləcəyi üçün 500 μl bufer RL1 üçün hüceyrələr.

7. Düzgün olmayan elüsyon həcmi və ya natamam elüsyon.

Tövsiyə: Təmizləmə sütununun elüsyon həcmi 50-200 μl-dir;elüsyon effekti qənaətbəxş deyilsə, əvvəlcədən qızdırılmış RNase-Free ddH əlavə etdikdən sonra otaq temperaturunda yerləşdirmə müddətini uzatmaq tövsiyə olunur.₂O, məsələn, 5-10 dəqiqə.

8.Təmizləmə sütununda Bufer RW2 yuyulmasından sonra etanol qalığı var.

Tövsiyə: Bufer RW2 yuyulduqdan sonra etanol qalığı varsa, 1 dəqiqə boş borunun sentrifuqalanması, boş borunun sentrifuqa əməliyyatı üçün vaxt 2 dəqiqəyə qədər artırıla bilər və ya qalıq etanolu adekvat şəkildə çıxarmaq üçün təmizləyici sütun otaq temperaturunda 5 dəqiqəyə yerləşdirilə bilər.

Təmizlənmiş RNT pozulur

Təmizlənmiş RNT-nin keyfiyyəti nümunənin qorunması, RNaz çirklənməsi və manipulyasiya və s. kimi amillərlə bağlıdır.

1. Toxuma nümunələri vaxtında saxlanılmır.

Tövsiyə: Əgər toxuma nümunələri və ya hüceyrələr toplandıqdan sonra vaxtında istifadə olunmazsa, dərhal -80 °C-də və ya maye azotda dondurulmuş konservləşdirin.RNT çıxarmaq üçün mümkün olduqda yeni alınmış toxuma və ya hüceyrə nümunəsindən istifadə edin.

2. Toxuma nümunələrinin təkrar dondurularaq əriməsi.

Tövsiyə: Toxuma nümunələrini saxlayarkən, konservasiya üçün onları kiçik parçalara ayırmaq və nümunənin təkrar dondurularaq əriməsinin və RNT-nin deqradasiyasının qarşısını almaq üçün onlardan istifadə edərkən onlardan birini çıxarmaq yaxşıdır.

3. RNase tətbiq edilir və ya əməliyyat zamanı birdəfəlik əlcəklər, maskalar və s.

Tövsiyə: RNT çıxarılması təcrübələri ən yaxşı ayrı RNT manipulyasiya otaqlarında aparılır və təcrübədən əvvəl cədvəl təmizlənir.

Təcrübə zamanı RNaz-ın tətbiqi nəticəsində yaranan RNT deqradasiyasını minimuma endirmək üçün birdəfəlik əlcəklər və maskalar taxın.

4. İstifadə zamanı reagentlər RNaz ilə çirklənir.

Tövsiyə: Müvafiq təcrübələr üçün yeni Heyvan Total RNT İzolyasiya Kiti ilə əvəz edin.

5. RNT manipulyasiyasında istifadə olunan sentrifuqa boruları, ucları və s. RNaz ilə çirklənmişdir.

Tövsiyə: RNT ekstraksiyasında istifadə olunan sentrifuqa borularının, ucların, pipetlərin və s.-nin hamısının RNazsız olduğunu təsdiq edin.

Təmizlənmiş RNT aşağı axın təcrübələrinə təsir göstərir

Təmizləmə sütunu ilə təmizlənmiş RNT, əgər duz ionları çox böyükdürsə, protein tərkibi aşağı axın təcrübəsinə təsir edəcək, məsələn: əks transkripsiya,Northern Blot et al.

1. Elüsyonlu RNT-də duz ionu qalıqları var.

Tövsiyə: RW2 tamponuna etanolun düzgün həcminin əlavə olunduğunu təsdiqləyin və əməliyyat üçün göstərilən mərkəzdənqaçma sürətində 2 təmizləyici sütunu yuyun;duz ionu qalığı varsa, təmizləyici sütunu otaq temperaturunda 5 dəqiqə Bufer RW2-də buraxın və duzun çirklənməsini maksimum dərəcədə aradan qaldırmaq üçün sentrifuqa edin.

2. Elyusiya edilmiş RNT-də etanol qalığı.

Tövsiyə: RW2 tamponunun yuyulmasından sonra boş borunun sentrifuqalama əməliyyatını əməliyyat üçün göstərilən santrifüqalama sürətində yerinə yetirdiyini təsdiqləyin, əgər hələ də etanol qalığı varsa, boş borunun sentrifuqa əməliyyatının vaxtını 2 dəqiqəyə qədər artırın və ya boş borunun yenidən sentrifuqanın çıxarılmasından sonra onu otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.

Nulsein turşusu nümunə növlərinin izolyasiyası

Foregene-nin RNT İzolyasiya dəstləri aşağıdakı nümunə qaynaqlarından ümumi RNT izolasiyası/ekstraksiyası əldə edə bilər: Heyvan toxuması, bitki, hüceyrə, viral, qan və s.

Kiti necə saxlamaq olar

Otaq temperaturunda 24 ay saxlama.