Nə qədər bilirsən

N haqqındauklein turşusunun çıxarılması

Təmizlənmiş nuklein turşusunun başlanğıcı və sonu

Başlanğıcda hər şey çətindir, təmizlənmiş nuklein turşusu ən çox

Sonrakı təcrübələr üçün molekulyar təcrübələrin başlanması

Uğur və ya uğursuzluq həlledici təsir göstərir.

İz/ultra-iz ultrabənövşəyi spektrofotometr bir çox elmi tədqiqatçılar tərəfindən bəyənilir, çünki o, nuklein turşusunun konsentrasiyasını və zülal və duz ionlarının qalıqlarını sadə, tez və qənaətlə aşkar edə bilir.

Hamımızın bildiyimiz kimi, A260 nuklein turşusunun absorbsiyasının OD dəyərini, A280 zülal konsentrasiyasının udulmasının OD dəyərini, A230 duz ionunun konsentrasiyasının OD dəyərini ifadə edir, beləliklə A260 nuklein turşusunun konsentrasiyasını, A260/280 zülal qalığını, A260/230 duz ionunun qalığını ifadə edir, lakin bu, yalnız tədqiqatların nəticələrinə əsaslanan çox sayda ölçüdür.şərtiDNT və RNT-nin saflığını izah edə biləcəyinə inanmaqmüəyyən dərəcədə.Bu, nuklein turşusunun məhsuldarlığının və saflığının müəyyən edilməsi üçün yeganə standart deyil, yalnız istinad kimi istifadə olunur və “qızıl standart” deyil.

Thermo Fisher ND-2000 təlimatı sınaq nəticələrinin etibarlılığını vurğulayır

Səbəb mikro/ultramikro UV spektrofotometrindən istifadə etməklə əldə edilən nəticələrin yalnız yan tərəfdən nuklein turşusunun məhsuldarlığını və saflığını əks etdirməsi və bir çox təsir edən amillərin (optik yol, nümunənin həcmi, nümunənin konsentrasiyası, pH dəyəri, absorbansın ölçülməsinə təsir edən digər ionlar və s.) olmasıdır, ölçülmüş OD dəyəri mütləq dəqiq deyil.Eyni zamanda, absorbsiya dəyərini təyin edən materialın spesifikliyinin olmaması səbəbindən, tək zəncirli DNT, iki zəncirli DNT, RNT, dNTP-lər və bəzi zülalların hamısının 260nm dalğa uzunluğunda udulma pik nöqtələri var və tək A260 ilə müəyyən edilən konsentrasiya mütləq həqiqi DNT və ya RNT deyil.Konsentrasiya və onun bütövlüyü və deqradasiyası mühakimə edilə bilməz.

Beləliklə, təmizlənmiş nuklein turşusumuzun keyfiyyətini necə qiymətləndirmək olar?Aşkarlama üçün mikro/ultramikro UV spektrofotometrindən istifadə etməklə yanaşı, nuklein turşusunun saflığını və bütövlüyünü vizual olaraq göstərmək və müəyyən dərəcədə konsentrasiyanı göstərmək üçün agaroz gel elektroforezi kimi üsullar da tələb olunur.Bu sayədə müxtəlif üsulların aşkarlanması nəticəsində əldə edilən nuklein turşusu məhsuldarlığı və saflığı etibarlıdır.

Eksperimental diaqramın müqayisəsi

H1299 hüceyrələrinin genomik DNT-si A şirkətinin DNT Ekstraksiya dəstlərindən istifadə edilərək çıxarıldı və yüksək OD dəyərləri ilə nəticələnən əhəmiyyətli çirklənmə aşkar edildi.

(OD ölçmə dəyəri və müvafiq elektroferoqram)

Qiymətləndirmə indeksi

Nuklein turşusu məhsuldarlığı və keyfiyyət sınağı üçün "qızıl standart" varmı?

Bildiyimiz qədər sadə, sürətli və ucuz üsul yoxdur.İstər spektrofotometr, istər gel elektroforezi, istərsə də kütləvi spektrometriya olsun, bunların hamısı müxtəlif aspektlərdən məhluldakı nuklein turşusunun konsentrasiyasını və saflığını əks etdirir və bir-birinə istinad edərək onları mühakimə etmək lazımdır.

Ən yaxşı qiymətləndirmə indeksi həmişədirtəqib eksperimental tətbiqi.Əks transkripsiyanın və PCR gücləndirilməsinin effektivliyinə təsir göstərmir.Etibarlı gücləndirmə məhsulları və Ct qiymətlərinin alınması və ardıcıllıqla tam ardıcıllığın əldə edilməsi uğurlu nuklein turşusunun çıxarılmasıdır.

Xülasə etmək üçün, yalnız nisbət nəzəriyyəsi "yaxşı eksperimental nəticələrdən yaxşı hasilat parametrləri kimi istifadə etmək" fikri ilə etiraz edilməlidir!

Yüksək DNT/RNT təmizliyi əldə etmək üçün tövsiyə olunan Foregene DNT RNT ekstraksiya dəstləri:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/