Qurğuşun

Uzun kodlaşdırmayan RNT, lncRNA, uzunluğu 200 nukleotiddən çox olan, ümumiyyətlə 200-100000 nt arasında olan kodlaşdırılmayan RNT-dir.lncRNA epigenetik, transkripsiya və post-transkripsiya səviyyələrində gen ifadəsini tənzimləyir və X xromosomunun susdurulmasında, genomun izlənməsi və xromatinin modifikasiyasında, transkripsiyanın aktivləşdirilməsində, transkripsiya müdaxiləsində, nüvə daşınmasında, hüceyrə dövrünün tənzimlənməsində, hüceyrə diferensiasiyasının tənzimlənməsində iştirak edir və bir çox digər təsirlərin kompensasiya edilməsində iştirak edir. insan xəstəliklərinin baş verməsi, inkişafı və qarşısının alınması və hazırda biotibb sahəsində qaynar nöqtələrdən biridir.

01  LncRNA-nın növləri və xüsusiyyətləri

lncRNA, yuxarıdakı şəkildə göstərildiyi kimi, formalaşmasının müxtəlif mənbələrinə görə bir çox növə bölünür.Aşağıdakı xüsusiyyətlərə malikdir:

1. lncRNA-lar adətən daha uzun olur, differensiasiya zamanı dinamik ifadə və müxtəlif qoşma üsulları ilə
2. Kodlaşdıran genlərlə müqayisədə lncRNA adətən daha aşağı ifadə səviyyəsinə malikdir
3. Əksər lncRNA-lar toxumaların differensasiyası və inkişafı prosesində aşkar zaman və məkan ifadə spesifikliyinə malikdir.
4. Şişlərdə və digər xəstəliklərdə xarakterik ifadələr var
5. lncRNA-nın hüceyrəaltı yerləri müxtəlifdir
6. Ardıcıllıq qorunma baxımından aşağıdır, lakin funksiyanın müəyyən dərəcədə qorunma dərəcəsi var və s.

02 LncRNA Əks Transkripsiyası haqqında Tez-tez verilən suallar

Hüceyrələrdə lncRNA-nın az olması, uzun uzunluğu və yüksək səviyyəli quruluşu səbəbindən belə RNT çox vaxt gövdə ilgəkləri və ya saç sancaqları kimi mürəkkəb strukturlara malikdir və RT-qPCR uğursuz əks transkripsiya və ya aşağı effektivlik problemlərinə meyllidir.

03 LncRNA tərs transkripsiya həlli

Mərkəzi qaydada RNT viruslarının öz əks transkriptazasından istifadə edərək, şablon kimi RNT istifadə edərək DNT sintezi prosesi tərs transkripsiya adlanır.cDNA şablonunu in vitro sintez etmək üçün RNT virusunun əks transkriptazasından istifadə prosesi əks transkripsiya adlanır.Əks transkripsiya sisteminə daxil olan əsas elementlər: RNT şablonu, əks transkriptaza, primerlər və digər komponentlər.

1.RNT şablonu

RNT şablonunun tərs transkripsiyaya təsiri onun strukturunda, saflığında və bütövlüyündə əks olunur.Çıxarılan RNT-nin saflığı və bütövlüyü nə qədər yüksək olarsa, əks transkripsiyanın effektivliyi bir o qədər yüksək olar və sonrakı kəmiyyət nəticələri bir o qədər dəqiq olar.Tez-tez istifadə olunan RNT ekstraksiya reagentləri ilə təmizlənmiş RNT çox vaxt əks transkriptazaların əksəriyyətinə güclü inhibitor təsir göstərən spirt və guanidin duzlarının qalıqlarını ehtiva edir.

2. Əks transkriptaza

Əks transkriptaza bütün əks transkripsiya sistemində əsas təsirə malikdir.Əksər laboratoriyalarda istifadə olunan tərs transkriptaza üçün uyğun temperatur ümumiyyətlə 42°C-dir.Əslində, yüksək səviyyəli RNT strukturunun açılması daha yüksək temperatur tələb edir və əks transkriptaza tələblər daha yüksəkdir.

3.Astar

Əks transkripsiya primerlərinə gen-spesifik primerlər, təsadüfi primerlər və Oligo dT primerləri daxildir.Əksər lncRNA-larda polyA quyruqları yoxdur və təsadüfi primerləri Oligo dT ilə düzgün uyğunlaşdırmaq vacibdir.

4. Digər komponentlər

RNT-nin parçalanmasının xüsusilə asan olduğunu nəzərə alaraq, əks transkripsiya sisteminə komponentlərin daxil edilməsi minimuma endirilə bilər ki, bu da RNaz-ın daxil olmasını effektiv şəkildə qarşısını ala bilər və əks transkripsiyanın rəvan gedişini təmin edə bilər.

ForegenRNT şablonundan qPCR-ə əks transkripsiya əldə edir

lncRNA aşkarlamanızı hərtərəfli müşayiət edin

Heyvanların ümumi RNT IhəllKit (gDNT çıxarma sütunu ilə)

Hüceyrə ümumi RNT IhəllKit (gDNT çıxarma sütunu ilə)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase ilə)(lncRNA-dan birinci zəncir cDNA sintezi üçün Super Premiks)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aüstünlükləri ofRNT çıxarılması:

Kit üçüncü nəsil RNT ekstraksiya texnologiyasından istifadə edir, DNase istifadə etməyə ehtiyac yoxdur.

96, 24, 12 və 6 quyulu boşqab kultivasiya edilmiş hüceyrələrdən 11 dəqiqə, gDNT-dən azad, yüksək saflıqda, yüksək keyfiyyətli ümumi hüceyrə RNT-nin yüksək effektivliklə çıxarılması.

LncRNA tərs transkripsiyasının üstünlükləri:

Genomik DNT çirklənməsini tez aradan qaldırmaq üçün LncRNA üçün xüsusi olaraq hazırlanmış tərs transkripsiya sistemi.

Əks transkripsiya sistemi yüksək istilik sabitliyinə malikdir və hələ də 50 ° C-də yaxşı tərs transkripsiya performansına malikdir.

Yüksək GC məzmunu və mürəkkəb ikinci dərəcəli strukturu olan şablonlar yüksək effektivliklə geri qaytarıla bilər.

Üstünlüklərof qPCR:

İsti başlanğıc Foregene Taq Polimeraz daha yüksək gücləndirmə səmərəliliyinə, daha yüksək gücləndirmə həssaslığına və daha yüksək gücləndirmə spesifikliyinə malikdir.

Optimallaşdırılmış Real PCR Easy Mix SYBR Green I-i daha yüksək aşkarlama həssaslığına malikdir və onun flüoresans intensivliyi oxşar məhsullardan 3-5 dəfə çoxdur ki, bu da müxtəlif növ flüoresan kəmiyyət təcrübələrinin ehtiyaclarını ödəyə bilir.