Eşitmə itkisi (HL) insanlarda ən çox rast gəlinən duyğu əlilliyi xəstəliyidir.İnkişaf etmiş ölkələrdə uşaqlarda prelingual karlıq hallarının təxminən 80%-i genetik faktorlardan qaynaqlanır.Ən çox rast gəlinən tək gen qüsurlarıdır (şəkil 1-də göstərildiyi kimi), 124 gen mutasiyasının insanlarda qeyri-sindromik eşitmə itkisi ilə əlaqəli olduğu aşkar edilmişdir, qalanları ətraf mühit amillərindən qaynaqlanır.Koxlear implant (daxili qulağa yerləşdirilən və bilavasitə eşitmə sinirinə elektrik stimullaşdırılmasını təmin edən elektron cihaz) ağır HL müalicəsi üçün ən təsirli seçimdir, eşitmə cihazı isə (səs dalğalarını çevirən və gücləndirən xarici elektron cihaz) orta dərəcəli HL olan xəstələrə kömək edə bilər.Bununla belə, hazırda irsi HL (GHL) müalicəsi üçün heç bir dərman yoxdur.Son illərdə gen terapiyası daxili qulaq disfunksiyasını müalicə etmək üçün perspektivli bir yanaşma kimi artan diqqəti cəlb edir.

Şəkil 1.Karlıqla bağlı variasiya növünün paylanması.[1]

Bu yaxınlarda Salk İnstitutu və Şeffild Universitetinin alimləri irsi karlığın in vivo gen terapiyasının geniş tətbiqi perspektivlərini göstərən Molekulyar Terapiya – Metodlar və Klinik İnkişaf [2] adlı tədqiqatın nəticəsini dərc etdilər.Salk İnstitutunun tədqiqatçı professoru və Qabaqcıl Biofotonika üzrə Waitt Mərkəzinin direktoru Uri Manor, ağır eşitmə itkisi ilə doğulduğunu və eşitmə qabiliyyətini bərpa etməyin gözəl bir hədiyyə olacağını hiss etdiyini söylədi.Onun əvvəlki araşdırması müəyyən etdi ki, Eps8 aktin bağlama və qapaq fəaliyyəti ilə aktin tənzimləyici zülaldır;koxlear saç hüceyrələrində Eps8-in MYO15A, WHIRLIN, GPSM2 və GNAI3 ilə əmələ gətirdiyi zülal kompleksi əsasən ən çox mövcuddur. MYO15A ilə birlikdə BAIAP2L2-ni daha qısa stereosiliyaların uclarında lokallaşdıran uzun stereosiliyaların ucları saç dəstələrinin saxlanması üçün tələb olunur.Buna görə də, Eps8 normal eşitmə funksiyası üçün vacib olan saç hüceyrələrinin stereosiliyasının uzunluğunu tənzimləyə bilər;Eps8-in silinməsi və ya mutasiyası qısa stereosiliyaya gətirib çıxaracaq ki, bu da onu beynin qavrayışı üçün səsi elektrik siqnallarına düzgün çevirə bilməyəcək və bu da öz növbəsində karlığa gətirib çıxaracaq..Eyni zamanda, Şeffild Universitetinin professoru Walter Marcotti, Eps8 olmadıqda saç hüceyrələrinin normal inkişaf edə bilməyəcəyini təsbit etdi.Bu araşdırmada Manor və Marcotti, Eps8-in stereosiliar hüceyrələrə əlavə edilməsinin onların funksiyalarını bərpa edə biləcəyini və öz növbəsində siçanlarda eşitmə qabiliyyətini yaxşılaşdıra biləcəyini araşdırmaq üçün bir araya gəldilər.Tədqiqat qrupu vəhşi tipli EPS8 ehtiva edən kodlaşdırma ardıcıllığını Eps8-/- yeni doğulmuş P1-P2 siçanlarının kokleasına yuvarlaq pəncərə membranı inyeksiyası ilə çatdırmaq üçün adeno ilə əlaqəli virus (AAV) vektoru Anc80L65 istifadə etdi;siçan koxlear tük hüceyrələrində Stereosiliya funksiyası onlar yetişməmişdən əvvəl bərpa edilmişdir;və təmir effekti görüntüləmə texnologiyası və stereosiliyanın ölçülməsi ilə xarakterizə olunurdu.Nəticələr göstərdi ki, Eps8 stereosiliyanın uzunluğunu artırdı və aşağı tezlikli hüceyrələrdə saç hüceyrələrinin funksiyasını bərpa etdi.Onlar həmçinin müəyyən ediblər ki, zaman keçdikcə hüceyrələr bu gen terapiyası ilə xilas olmaq qabiliyyətini itirir.Nəticə ondan ibarətdir ki, bu müalicənin uşaqlıqda aparılması tələb oluna bilər, çünki siçanlar doğulduqdan sonra Eps8-/- saç hüceyrələri yetişmiş və ya bərpa oluna bilməyəcək şəkildə zədələnmiş ola bilər."Eps8 çox müxtəlif funksiyaları olan bir zülaldır və araşdırmaq üçün hələ çox şey var" dedi Manor.Gələcək tədqiqatlar Eps8 gen terapiyasının müxtəlif inkişaf mərhələlərində eşitmə qabiliyyətinin bərpasında təsirinin araşdırılmasını və müalicə imkanlarını uzatmağın mümkün olub-olmamasını əhatə edəcək.Təsadüfən, 2020-ci ilin noyabrında İsrailin Təl-Əviv Universitetinin professoru KarenB Avraham, zərərsiz sintetik adeno-assosiasiyalı virus AAV9-PHP yaratmaq üçün innovativ gen terapiyası texnologiyasından istifadə edərək öz nəticələrini EMBO Molecular Medicine [3] jurnalında dərc etdi.B, Syne4-/- siçanlarının tük hüceyrələrindəki gen qüsuru, Syne4-ün kodlaşdırma ardıcıllığını daşıyan virusu siçanların daxili qulağına yeridərək, onun tük hüceyrələrinə daxil olmasına və daşınan genetik materialı sərbəst buraxaraq onların yetkinləşməsinə və normal fəaliyyət göstərməsinə imkan yaradaraq düzəldildi (şəkil 2-də olduğu kimi).

Şəkil 2.Korti orqanına və nesprin-4-ün hüceyrə funksiyasına diqqət yetirməklə daxili qulaq anatomiyasının sxematik təsviri.

Müalicə üçün hər hansı mutasiyaya uğramış genlərin daxil edilməsi, çıxarılması və ya korreksiyası (yəni xəstəlikdə olan genetik dəyişikliklərə nəzarət) yolu ilə gen səviyyəsində irsi xəstəliklərin müalicəsi məqsədinə nail olmaq üçün gen terapiyasından istifadənin yüksək klinik effekt verdiyini görmək olar.tətbiqi perspektivləri.Genetik çatışmazlığı olan karlıq üçün mövcud gen terapiyası üsullarını aşağıdakı kateqoriyalara bölmək olar:

gen dəyişdirilməsi

Genin dəyişdirilməsi, qüsurlu genin müəyyən edilməsinə və genin normal və ya vəhşi tipli nüsxəsi ilə dəyişdirilməsinə əsaslanan gen terapiyasının ən “sadə” formasıdır.Vezikulyar glutamat daşıyıcısı 3 (VGLUT3) geninin silinməsi nəticəsində yaranan eşitmə itkisi üçün ilk uğurlu daxili qulaq gen terapiyası;Daxili qulaq tük hüceyrələrində (IHCs) ekzogen VGLUT3 həddindən artıq ifadəsinin AAV1 vasitəçiliyi ilə çatdırılması davamlı eşitmə bərpası, qismən lent sinaptik morfologiyasının bərpası və konvulsiv cavablarla nəticələnə bilər [4].Bununla belə, yuxarıdakı girişdə təsvir edilən iki AAV ilə ötürülən gen dəyişdirilməsini əhatə edən nümunələrdə qeyd etmək lazımdır ki, müəyyən növ gen silinməsi irsi eşitmə itkisi pozğunluqları üçün istifadə olunan siçan modelləri insanlardan müvəqqəti olaraq fərqlidir və P1 siçanlarında daxili qulaq inkişaf mərhələsindədir.Bunun əksinə olaraq, insanlar yetkin daxili qulaqla doğulurlar.Bu fərq, gen terapiyası yetkin siçan qulaqlarına çatdırılmasa, siçan nəticələrinin insan irsi karlıq xəstəliklərinin müalicəsində mümkün tətbiqinin qarşısını alır.

Gen Redaktəsi: CRISPR/Cas9

“Gen dəyişdirilməsi” ilə müqayisədə gen redaktoru texnologiyasının inkişafı genetik xəstəliklərin kökündən müalicəsinin başlanğıcını gətirdi.Əhəmiyyətli odur ki, gen redaktə üsulu dominant irsi karlıq xəstəlikləri üçün uyğun olmayan ənənəvi overexpression gen terapiyası üsullarının çatışmazlıqlarını və həddindən artıq ifadə metodunun uzun sürməməsi problemini kompensasiya edir.Çinli tədqiqatçılar AAV-SaCas9-KKH-Myo6-g2 gen redaktə sistemindən istifadə edərək Myo6WT/C442Y siçanlarında Myo6C442Y mutant allelini xüsusi olaraq nokauta etdikdən sonra və nokautdan sonra 5 ay ərzində siçanlar Modelin eşitmə funksiyası bərpa olundu;eyni zamanda daxili qulaqda tük hüceyrələrinin yaşama sürətinin yaxşılaşdığı, kirpiklərin formasının nizamlılaşdığı, elektrofizioloji göstəricilərin korreksiya edildiyi də müşahidə edilmişdir [5].Bu, Myo6 gen mutasiyasının səbəb olduğu irsi karlığın müalicəsi üçün CRISPR/Cas9 texnologiyasından istifadə edən dünyada ilk tədqiqatdır və irsi karlığın müalicəsi üçün gen redaktə texnologiyasının mühüm tədqiqat tərəqqisidir.Müalicənin klinik tərcüməsi möhkəm elmi əsas verir.

Gen terapiyasının çatdırılma üsulları

Gen terapiyasının müvəffəqiyyətli olması üçün çılpaq DNT molekulları hidrofilliyi və fosfat qruplarının mənfi yükü səbəbindən hüceyrələrə təsirli şəkildə nüfuz edə bilmir və əlavə edilmiş nuklein turşusu molekullarının bütövlüyünü təmin etmək üçün təhlükəsiz və təsirli bir üsul seçilməlidir.Əlavə edilmiş DNT hədəf hüceyrəyə və ya toxumaya çatdırılır.AAV yüksək yoluxucu təsiri, aşağı immunogenliyi və müxtəlif toxuma növlərinə geniş tropizmi səbəbindən xəstəliyin müalicəsi üçün çatdırılma vasitəsi kimi geniş istifadə olunur.Hazırda çoxlu tədqiqat işi siçan kokleasında müxtəlif hüceyrə tiplərinə nisbətən AAV-nin müxtəlif alt tiplərinin tropizmini müəyyən etmişdir.Hüceyrə spesifik promotorlarla birlikdə AAV çatdırılma xüsusiyyətlərindən istifadə, hədəfdən kənar təsirləri azalda bilən hüceyrəyə xüsusi ifadəyə nail ola bilər.Bundan əlavə, ənənəvi AAV vektorlarına alternativ olaraq, yeni sintetik AAV vektorları daim inkişaf etdirilir və daxili qulaqda üstün transduksiya qabiliyyətini göstərir, bunlardan AAV2/Anc80L65 ən çox istifadə olunur.Qeyri-viral çatdırılma üsullarını daha çox fiziki üsullara (mikroinyeksiya və elektroporasiya) və kimyəvi üsullara (lipid əsaslı, polimer əsaslı və qızıl nanohissəciklər) bölmək olar.Hər iki yanaşma irsi karlıq pozğunluqlarının müalicəsində istifadə edilmiş və fərqli üstünlüklər və məhdudiyyətlər göstərmişdir.Bir vasitə kimi gen terapiyası üçün çatdırılma vasitəsinə əlavə olaraq, müxtəlif hədəf hüceyrə tiplərinə, tətbiq marşrutlarına və terapevtik effektivliyə əsasən in vivo gen administrasiyası üçün müxtəlif yanaşmalar istifadə edilə bilər.Daxili qulağın mürəkkəb quruluşu hədəf hüceyrələrə çatmağı çətinləşdirir və genomu redaktə edən agentlərin paylanması yavaş olur.Membranlı labirint temporal sümüyün sümüklü labirintində yerləşir və koxlear kanal, yarımdairəvi kanal, utrikül və balondan ibarətdir.Onun nisbi izolyasiyası, minimal limfa dövranı və qandan qan-labirint maneəsi ilə ayrılması terapevtiklərin yalnız yeni doğulmuş siçanlara effektiv sistemli çatdırılmasını məhdudlaşdırır.Gen terapiyası üçün uyğun viral titrləri əldə etmək üçün viral vektorların daxili qulağa birbaşa yerli yeridilməsi lazımdır.Müəyyən edilmiş inyeksiya yollarına [6] daxildir: (1) dəyirmi pəncərə membranı (RWM), (2) traxeostomiya, (3) endolimfatik və ya perilimfatik koxleostomiya, (4) dəyirmi pəncərə membranı və boru fenestrasiyası (CF) (şəkil 3-də olduğu kimi).

Şəkil 3.Gen terapiyasının daxili qulaq çatdırılması.

Klinik tərcümə məqsədləri əsasında gen terapiyasında bir çox irəliləyişlər əldə olunsa da, gen terapiyasının genetik xəstəlikləri olan xəstələr üçün, xüsusən də təhlükəsiz və effektiv vektorların və çatdırılma metodunun işlənib hazırlanmasında birinci dərəcəli müalicə variantına çevrilməsi üçün daha çox iş görülməlidir.Lakin biz inanırıq ki, yaxın gələcəkdə bu cür müalicələr fərdiləşdirilmiş terapiyanın əsas hissəsinə çevriləcək və genetik pozğunluğu olan insanların və onların ailələrinin həyatına böyük müsbət təsir göstərəcək.

Foregene həmçinin hədəflənmiş genlər üçün yüksək məhsuldarlıqlı skrininq dəstini işə saldı, bu, sürətlidir və RNT ekstraktı olmadan tərs transkripsiya və qPCR reaksiyalarını yerinə yetirə bilir.

Məhsul Linkləri

Cell Direct RT-qPCR dəsti—Taqman/SYBR GREEN I

Məhsul haqqında ətraflı məlumat üçün əlaqə saxlayın:

overseas@foregene.com