SOP Sisteminin qurulması

Təcrübə işçilərinin davranışını standartlaşdırmaq üçün PCR təcrübəsi SOP-nu qurun.

Təcrübəçilər əməliyyat prosedurlarına ciddi şəkildə riayət edir və insan faktorlarının səbəb ola biləcəyi PCR çirklənməsini minimuma endirirlər və ya əməliyyat zamanı çirklənmənin qarşısını alırlar.Bundan əlavə, eksperimentator müvafiq avadanlığı idarə etmək, bütün iş prosesini aydınlaşdırmaq, çirklənmənin müalicə üsullarını və laboratoriya keyfiyyətinə nəzarət üsullarını mənimsəmək və sınaq nəticələrini düzgün şərh etmək bacarığı daxil olmaqla, müvafiq peşəkar bilik və bacarıqlara malik olmalıdır.

Standart PCR Laboratoriyasının qurulması

PCR laboratoriyası prinsipcə dörd sahəyə bölünür, yəni reagent hazırlama sahəsi, nümunənin emal sahəsi, gücləndirmə sahəsi və gücləndirmə məhsulunun təhlili sahəsi.İlk iki sahə pre-amplifikasiya sahələri, son iki sahə isə gücləndirmə sonrası sahələrdir.Əvvəlcədən gücləndirmə zonası və gücləndirmə sonrası zona ciddi şəkildə ayrılmalıdır.Eksperimental materiallar, reagentlər, qeyd kağızı, qələmlər, təmizləyici materiallar və s. yalnız gücləndirmədən əvvəlki sahədən sonrakı gücləndirmə sahəsinə, yəni reagentin hazırlanması sahəsindən, nümunənin emal sahəsindən, gücləndirici sahədən və gücləndirici məhsulun təhlili sahəsindən axa bilər və əks istiqamətdə axmamalıdır.Laboratoriyada hava axını həm də gücləndirmə öncəsi sahədən gücləndirmədən sonrakı sahəyə axmalıdır, əksinə deyil.

Eksperimental addımları azaldın

Laboratoriya yalnız PCR aşkarlama və identifikasiyanı həyata keçirirsə, adi PCR əvəzinə flüoresan kəmiyyət PCR istifadə etmək tövsiyə olunur.

Floresan kəmiyyət PCR aşkarlama nəticələri flüoresan siqnallarla toplana və təhlil edilə bilər, buna görə də reaksiyadan sonra elektroforez üçün qapağı açmağa ehtiyac yoxdur, bu da aerozolların əmələ gəlməsi üçün reaksiya məhsullarının sızması nəticəsində yaranan PCR məhsullarının çirklənməsinin qarşısını alır.Gel elektroforezinin yükləmə mərhələsi zamanı qapaq açılışlarının sayını artırsanız, aerozol çirklənməsi ehtimalı var.Kəmiyyət PCR-nin tətbiqini təşviq etmək və tədricən keyfiyyət PCR-ni əvəz etmək tövsiyə olunur.

UNG çirklənmə əleyhinə sistemi qəbul edin

PCR reaksiyası üçün UNG anti-PCR məhsulunun çirklənmə sistemi istifadə olunur.

Sistem dTTP əvəzinə dUTP istifadə edir.PCR reaksiyasından sonra bütün PCR məhsulları (DNT fraqmentləri) dUTP ilə birləşdirilir;PCR reaksiyasının növbəti raundunda sistemə əlavə edilən UNG fermenti spesifik ola bilən PCR-dan əvvəl 37°C-də 5 dəqiqə inkubasiya edilir, tərkibində dUTP olan bütün DNT fraqmentləri parçalanır və sonra PCR reaksiyası həyata keçirilir.Bu, PCR məhsullarının səbəb olduğu aerozol çirklənməsini tamamilə aradan qaldıra bilər.Effekt aşağıdakı şəkildə göstərilmişdir:

Qeyd: Birbaşa PCR seriyası üçün siz FJ Biotech-in anti-PCR məhsullarının çirklənməsi sisteminin seriya məhsullarını seçə bilərsiniz.

Təklif

Geniş miqyaslı genotipləşdirmə sınaqlarını aparan laboratoriyalar üçün ağlabatan laboratoriyaların tikintisi ilə yanaşı, reagentləri sınaqdan keçirmək üçün UNG anti-PCR məhsulunun çirklənmə sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur.

Xatırlatma: Bu sistemin istifadəsi artıq səbəb olmuş PCR məhsulunun çirklənməsini aradan qaldıra bilməz.Buna görə də, müvafiq testin əvvəlində UNG sistemi istifadə edilməlidir və PCR məhsullarının çirklənməsinin qarşısını almaq üçün UNG sistemi həmişə PCR gücləndirilməsi üçün istifadə edilməlidir.Yanlış müsbət.

Geniş miqyaslı sınaqlar apararkən Forge Biotech-in Direct PCR-UNG sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur, məsələn: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Bitki Toxumu Birbaşa PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Foregene-dən olan bu dəstlər seriyası nəinki PCR aşkarlamasını tez və geniş miqyasda həyata keçirə bilər, həm də PCR məhsulunun çirklənməsinin qarşısının alınması və idarə olunmasının effektivliyini təmin edir.