1: Eksperimental ləvazimatları vaxtında dəyişdirin

(NTC) mənfi nəzarəti qurun və onu dəfələrlə təkrarlayın.Laboratoriyada PCR məhsulunun çirklənməsi aşkar edildikdə, bütün eksperimental ehtiyatları vaxtında dəyişdirin.Məsələn: primerləri yenidən seyreltin və hazırlayın, pipetin ucunu, EP borusunu, ddH2O və s. yenidən sterilizasiya edin, yeni pipetlə əvəz edin və PCR təcrübələrini yerinə yetirmək üçün müvəqqəti olaraq digər laboratoriyaları götürün.Təcrübəyə davam etməzdən əvvəl çirklənmiş laboratoriya havalandırılmalı və PCR məhsulunun çirklənməsi aradan qaldırılana qədər ultrabənövşəyi şüalarla şüalandırılmalıdır.

2:UV-ə məruz qalma müddətini uzadın

Qeyd etmək lazımdır ki, DNT çirklənməsini aradan qaldırmaq üçün müntəzəm ultrabənövşəyi şüalanma adi haldan 2 saat uzadılmalıdır.Bununla belə, UV şüalanmasının DNT çirklənməsinin kiçik fraqmentlərinin (200bp-dən aşağı) çıxarılmasına təsiri hələ də yaxşı deyil.

Ultrabənövşəyi dalğa uzunluğu (nm) ümumiyyətlə 254/300 nm-dir və 30 dəqiqə şüalanma üçün kifayətdir.Qeyd etmək lazımdır ki, qalıq PCR məhsullarının çirklənməsini aradan qaldırmaq üçün UV seçərkən, PZR məhsulunun uzunluğu və məhsul ardıcıllığında əsasların paylanması nəzərə alınmalıdır.UV şüalanması yalnız 500 bp-dən yuxarı olan uzun fraqmentlər üçün effektivdir və qısa fraqmentlərə az təsir göstərir.

UV şüalanması zamanı PCR məhsulunda olan pirimidin əsasları dimerlər əmələ gətirir.Bu dimerlər uzadmanı dayandıra bilər, lakin DNT zəncirindəki bütün pirimidinlər dimerlər əmələ gətirə bilməz və UV şüalanması da dimerləri qıra bilər..Dimerin əmələ gəlmə dərəcəsi UV dalğa uzunluğundan, pirimidin dimerinin növündən və dimer sahəsinə bitişik nukleotidlərin ardıcıllığından asılıdır.Buna görə də, PCR gücləndirilmiş fraqmentləri kiçikdirsə, UNG anti-PCR məhsulunun çirklənməsi sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur.

3: Ümumi istifadə edilən DNT çirklənməsini təmizləyənlər

Pipetlər əlavə edildikdə aerozollar asanlıqla əmələ gəlir, bunun qarşısını almaq çətindir və tez çökəcək.Buna görə də, şübhəsiz ki, DNT çirklənməsinin yayılmasının qarşısını almaq üçün xüsusi DNT çirkləndiricilərindən tez-tez istifadə etmək yaxşı seçimdir.

4: UNG çirklənmə əleyhinə sistemindən istifadə edin

PCR məhsulunun çirklənməsi aradan qaldırıldıqdan sonra sınaq laboratoriyası PCR məhsulunun çirklənməsinin qarşısını almaq üçün UNG anti-PCR məhsulunun çirklənməsi sistemindən istifadə edə bilər.Ümumi laboratoriyalarda siz sadə eksperimental arakəsmələr yerinə yetirə, PZR məhsulunun sahəsini digər sahələrdən ciddi şəkildə ayıra, müəyyən laboratoriya qaydaları və qaydaları müəyyən edə və PZR məhsulunun çirklənməsinin qarşısını almaq üçün müvafiq təlim keçirə bilərsiniz.

Tövsiyələr: Ağlabatan PCR laboratoriyasının yaradılması, yaxşı PCR mühitinin saxlanılması, standart PCR əməliyyat prosedurlarının formalaşdırılması və eksperimentçilərin ciddi əməliyyat məlumatlılığının artırılması PCR təcrübələrinin çirklənməsinin qarşısının alınması və ya azaldılması üçün açardır.