Mümkün problemlərin aşağıdakı təhliliBukkaltampon/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Təmizləmə sütunu tıxanmışdır

Bu dəstdə genomik DNT ekstraksiya əməliyyatında təmizləyici sütun sentrifuqasiya mərhələsi olmadan nümunənin fermentativ lizis qarışığına birbaşa adsorbsiya edilir və təmizlənmə sütunu natamam enzimləşmə və nümunənin yüksək özlülüyünə görə bloklana bilər.

Aşağıdakı mümkün səbəblər aşağıdakılardır:

1. Toxuma nümunələrinin natamam enzimatik həzmi.

Tövsiyə: Foregene Protease nümunəsinin emal müddəti müvafiq şəkildə uzadıla bilər və ya supernatant 12,000 rpm (~13,400) sentrifuqadan sonra götürülə bilər.× g) 5 dəqiqə.

2. Toxuma nümunələrinin və ya böyük toxumaların həddindən artıq istifadəsi.

Tövsiyə: 1-dən çox olmamaq daha yaxşıdırBukkal nümunədə tampon;nümunə çox böyükdürsə, müvafiq olaraq Buffer ST1, Foregene Protease, bufer ST2 dozasını artırın.

3. Nümunənin özlülüyü çox yüksəkdir.

Tövsiyə: Nümunələr genomik DNT ekstraksiyasından əvvəl 10 mM Tris-HCl ilə müvafiq şəkildə seyreltilə bilər.

4. Qan kartının fraqmentləri soruldu.

Tövsiyə: Qan ləkəsinin (FTA Kartı) genomik çıxarılmasının 6-cı addımının keçici sentrifuqalama vaxtı müvafiq şəkildə uzadıla bilər.

Aşağı məhsuldarlıq və ya DNT yoxdur

Çox vaxt genomik DNT məhsuldarlığına təsir edən müxtəlif amillər, o cümlədən nümunənin mənşəyi, nümunənin saxlanma şəraiti, nümunənin hazırlanması, manipulyasiya və s.

Ekstraksiya zamanı genomik DNT əldə edilə bilməz

Mümkün səbəblər aşağıdakılardır:

1. Nümunələrin düzgün saxlanmaması və ya çox uzun müddət saxlanması genomik DNT deqradasiyasına gətirib çıxarır.

Tövsiyə: Ağızdan tamponlar təzə nümunə götürülməlidir və genomik DNT ekstraksiya əməliyyatları üçün konservləşdirilmiş tamponlardan istifadə etmək məsləhət görülmür;qan ləkəsi nümunələri keyfiyyətin uyğun olmasını təmin etməlidir və saxlama müddəti çox uzun olmamalıdır.

2. Toxumanın çox az istifadəsi müvafiq genomik DNT-nin çıxarılması ilə nəticələnə bilməz.

Tövsiyə: əməl edinbuccal əməliyyat təlimatında tampon nümunəsi götürmə təlimatlarını yazın və genomik DNT çıxarılması üçün ağız tamponuna kifayət qədər hüceyrə əlavə oluna bilməsi üçün mümkün qədər çox silin;qan ləkəsi nümunəsinin çıxarılması üçün qan ləkəsinin kəsmə sahəsi müvafiq olaraq artırıla bilər.

3. Foregene Proteaz düzgün olmayan şəkildə qorunub saxlanılır, nəticədə onun aktivliyi azalır və ya inaktivləşir.

Tövsiyə: Saxlama şərtlərini təsdiqləyinForegene Proteaz və ya enzimatik reaksiya üçün yeni Foregene Proteaz ilə əvəz edin.

4. Kitin düzgün saxlanmaması və ya saxlama müddəti çox uzundur, nəticədə dəstin bəzi komponentləri sıradan çıxır.

Tövsiyə: Yenisini alınBukkal tampon DNTizolə müvafiq prosedurlar üçün dəst.

5. Bufer WB mütləq etanol əlavə etmir.

Tövsiyə: WB tamponunun mütləq etanolun düzgün həcmini əlavə etdiyini təsdiqləyin.

6. Silikon filmə eluent düzgün əlavə olunmayıb.

Tövsiyə: 65 əlavə edin°Cəvvəlcədən isidilmiş eluent silikon membranın ortasına düşür və elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxır.

Lməhsuldar genomik DNT təcrid olunmuş

Aşağıdakı mümkün səbəblər aşağıdakılardır:

1. Nümunələrin düzgün saxlanmaması və ya çox uzun müddət saxlanması genomik DNT deqradasiyasına gətirib çıxarır.

Tövsiyə: Ağızdan alınan tamponlar tercihen təzə alınmışdır və konservləşdirilmiş tamponlar genomik DNT ekstraktı üçün istifadə edilməməlidir.

2. Əgər toxuma nümunəsinin miqdarı çox azdırsa, ekstraksiya edilmiş genomik DNT tərkibi daha az olacaq.

Tövsiyə: Genomik DNT ekstraksiyası üçün ağız tamponuna kifayət qədər hüceyrə əlavə oluna bilməsi üçün əməliyyat təlimatındakı ağızdan tampon nümunəsi götürmə təlimatlarına əməl edin, mümkün qədər çox silin.

3. Foregene Proteaz düzgün olmayan şəkildə qorunub saxlanılır, nəticədə onun aktivliyi azalır və ya inaktivləşir.

Tövsiyə: Saxlama şərtlərini təsdiqləyinthe Foregene Proteaz və ya yenisi ilə əvəz edin Enzimatik reaksiya üçün Foregene Proteaz.

4. Eluent problemləri.

Tövsiyə: Elüsyon üçün Bufer EB istifadə edin;ddH istifadə edirsinizsə₂O və ya digər elüentlər, eluatın pH-nın 7,0-8,5 arasında olduğunu təsdiqləyin.

5. Eluat damla damla düzgün əlavə olunmur.

Tövsiyə: Silikon membranın ortasına eluent damcıları əlavə edin və elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.

6. Elüsyon mayesi çox az toplanır.

Tövsiyə: Genomik DNT elüsyonu üçün ən azı təlimatlarda tələb olunduğu kimi eluentdən istifadə edinaz olmayaraq 15-dən çoxμl.

Ley saflıq of genomik DNTtəcrid olunmuş

Aşağı genomik DNT təmizliyi aşağı axın təcrübələrinin uğursuzluğuna və ya qeyri-qənaətbəxş nəticələrinə səbəb ola bilər, məsələn: fermentləri kəsmək mümkün deyil, PCR maraq doğuran gen fraqmentini əldə edə bilməz və s.

Mümkün səbəblər aşağıdakılardır:

1. Heteroprotein çirklənməsi, RNT çirklənməsi.

Təhlil: Təmizləmə sütunu Buffer PW ilə yuyulmayıb;Buffer PW yuma təmizləyici sütunu düzgün mərkəzdənqaçma sürətindən istifadə edərək yuyulmadı.

Tövsiyə: Etanol əlavə etməzdən əvvəl supernatantda çöküntü olmadığından əmin olun;təmizləyici sütunu təlimatlara uyğun olaraq yumağınızdan əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.

2. Çirkli ionların çirklənməsi.

Təhlil: Bufer WB yuma təmizləmə sütunu buraxıldı və ya yalnız bir dəfə yuyuldu, nəticədə qalıq ion çirklənməsi yarandı.

Tövsiyə: Qalıq ionları mümkün qədər çıxarmaq üçün Buffer WB-ni 2 dəfə yuyun.

3. RNT fermentinin çirklənməsi.

Təhlil: Xarici RNases buferə əlavə edildi;Bufer PW yuyulması əməliyyatı səhv idi, nəticədə RNaz qalıqları yarandı və bu, in vitro transkripsiya kimi aşağı axın RNT eksperimental əməliyyatlarına təsir etdi.

Tövsiyə: Foregene seriyası nuklein turşusuisolation dəstləri əlavə RNaz əlavə etmədən RNT-ni çıxara bilər,beləliklə bukkal Swab/FTA Kartı DNT İzolyasiya Kitilazımdır't RNase əlavə edin;Bufer PW yuma təmizləyici sütun üçün təlimatlara əməl etməyinizə əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.

4. Etanol qalığı.

Təhlil: Bufer WB təmizləyici sütunu yuduqdan sonra boş boru sentrifuqasını həyata keçirmədi.

Tövsiyə: Təlimatlara uyğun olaraq düzgün boş borunun sentrifuqa əməliyyatını yerinə yetirin.

5. Digər çirkləri çirkləndirmə.

Təhlil: Saxlanmış nümunələr və ya xüsusi nümunələr əvvəlcədən müalicə olunmur.

Tövsiyə: Təlimatlara uyğun olaraq nümunəni hərtərəfli əvvəlcədən müalicə edin.