Müəlliflər: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Bölmə: Jiaozhou Xəstəxanası, Tongji Universitetinə bağlı Dongfang Xəstəxanası

Hazırda tənəffüs yoluxucu patogen nuklein turşusunun aşkarlanması üçün əsas nümunə növü boğaz tamponudur.Nümunələrin saxlanması üçün çox istifadə edilən bir çox məhlullar var, onların hamısının daşınması və saxlanması üçün soyudulması və ya dondurulması lazımdır;Toplama və daşınma prosesi zamanı aşağı temperaturun bütün prosesinə nəzarət etmək çətindir və nümunə testindən əvvəl keyfiyyətə nəzarəti təmin etmək çətindir.^[1-2].

RNase (RNase) RNT-ni hidroliz edən, əsasən nukleotidlər arasında fosfodiester bağlarını kəsən endonükleazdır.RNaz molekulu çox dayanıqlıdır, strukturunda disulfid bağları mövcuddur və onun aktivliyi ikivalentli kationların olmasını tələb etmir, ona görə də RNaz asanlıqla denatürasiya olunmur, hətta yüksək temperaturdan və ya denaturantlardan istifadə edildikdən sonra da renaturasiya etmək asandır.RNazlar endogen və ekzogen bölünür.Endogen RNazlar hüceyrələr parçalandıqda eyni vaxtda buraxıla bilər.Buna görə də, endogen RNazların rolunun aradan qaldırılması RNT hasilatı prosesində çox kritik bir addımdır.Ekzogen RNazlar geniş yayılmışdır.RNT-nin asanlıqla parçalanmasının vacib səbəbləri olan havada, insan dərisində, saçda və tüpürcəkdə RNazlar mövcuddur.^[3].

Məlumat sorğusu

CANS-CL02-A009 “Molekulyar Diaqnoz Sahəsində Tibbi Laboratoriyanın Keyfiyyəti və Bacarıqlarının Akkreditasiyası Təlimatlarının Tətbiqi” texniki tələblərdə tətbiqə uyğun olaraq müvafiq suyun keyfiyyət standartlarının formalaşdırılmasını təklif edir;Birdəfəlik hava keçirməyən qablar:

RNaz/Təsnifat

(1) RNase A

Ribonukleaza A (RNase A), iribuynuzlu heyvanların mədəaltı vəzindən əldə edilmiş, RNT-də pirimidin qalıqlarının 3′ ucuna xüsusi olaraq hücum edə bilən, bitişik nukleotidlər tərəfindən əmələ gələn sitozini və ya urasili kəsə bilən endoribonükleazdır.Fosfodiester bağı, reaksiyanın son məhsulu 3′ pirimidin nukleotid və sonunda 3′ pirimidin nukleotidi olan oliqonukleotiddir.

(2) RNaz T1

Ribonuklease T1 (RNase T1) Aspergillus orjzae-dən əldə edilir, o, xüsusi olaraq guaninin 3′-terminal fosfatına təsir edir və parçalanma yeri guaninin 3′ fosfatı ilə bitişik nukleotidlərin 5′ hidroksili arasındadır.Reaksiyanın son məhsulu 3′guanil turşusu və sonunda 3′guanil turşusu olan oliqonukleotid fraqmentləridir.

(3) RNase H

Ribonukleaza H (RNase H) ilk dəfə dana timus toxumasından kəşf edilib və onun kodlaşdıran geni Escherichia coli-yə klonlaşdırılıb.Xüsusilə DNT-ni deqradasiya edə bilər: RNT hibrid duplekslərindəki RNT zəncirləri, nəticədə 3′-OH və 5′-monofosfat ucları olan oliqonukleotidlər və mononükleotidlər əmələ gəlir, o, tək və ya cüt zəncirli DNT və ya RNT-ni deqradasiya edə bilməz.

RNase

Funksiya və istifadə

Ribonukleaza ribonuklein turşusunun (RNT) parçalanmasını kataliz edə bilər və süni şəkildə sintez edilə bilər.Dərman məlhəmi travma və oynaq ağrılarını müalicə etmək üçün yerli olaraq istifadə olunur.Məlumatlara görə, ribonukleaza ev sahibi hüceyrə metabolizmasını dəyişdirə, virus sintezini maneə törədə, in vitro qrip virusunun yayılmasını maneə törədə, toyuq embrionlarında peyvənd və herpes virusunun əmələ gəlməsini maneə törədə bilər.Epidemik ensefalitin müalicəsində faydalı olan ribonukleazanın gündəlik əzələdaxili 180 mq inyeksiyasının klinik istifadəsi, ribonukleazın ribonuklein turşusunun (RNT) parçalanmasını kataliz edə bilər və indi süni şəkildə sintez edilə bilər.Dərman məlhəmi travma və oynaq ağrılarını müalicə etmək üçün yerli olaraq istifadə olunur.Məlumatlara görə, ribonukleaza ev sahibi hüceyrə metabolizmasını dəyişdirə, virus sintezini maneə törədə, in vitro qrip virusunun yayılmasını maneə törədə, toyuq embrionlarında peyvənd və herpes virusunun əmələ gəlməsini maneə törədə bilər.Ribonükleazanın gündəlik 180 mq əzələdaxili yeridilməsi epidemik ensefalitin müalicəsi üçün faydalıdır.

RNase

İnhibitorun tərifi

RNaz inhibitor vahidinin tərifi: 5ng RNase A aktivliyinin 50%-ni inhibə etmək üçün tələb olunan fermentin miqdarı bir vahiddir.

RNaz inhibitorları necə işləyir

Guanidin izotiyosiyanat:

Quanidin izotiyosiyanat molekulyar formulu C2H6N4S olan üzvi birləşmədir.Əsasən bioloji təbabətdə, kimyəvi reagentlərdə və s. istifadə olunur. Quanidin izotiyosiyanat zülal parçalayıcı agentdir və molekulyar diaqnostik reagentlərdə tez-tez lizis məhlulunun əsas komponenti kimi istifadə olunur.O, toxuma parçalaya, hüceyrə quruluşunu məhv edə və nuklein turşusunu nukleoproteindən ayıra bilər və RNaz-a güclü denatürasiyaya malikdir.Hal-hazırda ən təsirli RNaz inhibitorudur.

TRIzol, hüceyrələrdən və ya toxumalardan birbaşa ümumi RNT çıxara bilən yeni ümumi RNT ekstraksiya reagentidir.Tərkibində fenol və guanidin izotiyosiyanat kimi maddələr var ki, bu da hüceyrələri sürətlə poza bilir və hüceyrələr tərəfindən buraxılan nukleazları maneə törədir.

(Lakin guanidin izotiyosiyanat laboratoriya tədqiqatçılarının sağlamlığı üçün təhlükəlidir.)

RNasin:

Siçovul qaraciyərindən və ya insan blastodermindən çıxarılan turşu qlikoproteini.Rnasin RNase-nin rəqabətsiz inhibitorudur və müxtəlif RNase-lərə bağlanaraq onları təsirsiz hala gətirir.

(Ətraflı məlumat: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hyüksək temperatur:

Yüksək temperatur da zülal denatürasiyasının ümumi vasitəsidir.

Dietilpirokarbonat (DEPC):

DEPC güclü, lakin natamam RNaz inhibitorudur və zülalları denatürasiya etmək üçün RNase aktiv qrupunun amin turşusu imidazol halqası ilə birləşərək RNaz aktivliyini maneə törədə bilir.

Vanadil ribonukleozid kompleksi:

Vanadium oksid ionları və nukleozidlərdən əmələ gələn, RNaz-a keçid maddələri şəklində bağlanan və RNaz-ın fəaliyyətini demək olar ki, tamamilə maneə törədə bilən kompleks.

digər:

SDS, karbamid, diatomlu torpaq və s. də RNaz-a müəyyən inhibitor təsir göstərir.

Ekspert rəyləri

Li Yujie Baş Texnik

Laboratoriya Departamentinin direktoru, Jiaozhou Xəstəxanası, Tongji Universitetinə bağlı Dongfang Xəstəxanası

Ekzogen RNase-nin biodeqradasiyasının qarşısını almaq üçün RNT çıxarılması prosesi zamanı maskalar, əlcəklər və papaqlar geyilməli və tez-tez dəyişdirilməlidir.Bütün şüşə qablar qurutma sobasında 200°C temperaturda 2 saatdan çox bişirilməlidir.Çörək bişirmək üçün istifadə olunan materiallar, məsələn, plastik, DEPC suyu ilə müalicə olunmalı və sonra distillə edilmiş su ilə yuyulmalıdır.RNT-nin çıxarılması, konservasiyası və identifikasiyası üçün istifadə olunan reagentlər və ya cihazlar RNT-yə həsr edilməli və müstəqil RNT əməliyyat sahəsi yaradılmalıdır.

istinadlar:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Avstraliyanın yerli uşaqlarında kəskin aşağı tənəffüs yolu infeksiyalarının başlamasından dərhal əvvəl nazofarenksdə bakteriya və viruslar.Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Çin Profilaktik Tibb Assosiasiyasının Xəstəxana İnfeksiyasına Nəzarət Şöbəsi.Klinik mikrob nümunələrinin toplanması və yoxlanması üçün təlimatlar [J].Çin Xəstəxana İnfeksiyası Jurnalı, 2018(20):3192-3200.

[3] "Klinik Test On Min Niyə Molekulyar Biologiya Test Həcmi"