Giriş:

RNT, elmi adı ribonuklein turşusu, kısaltması RiboNucleic Acid-dən gəlir, ən azı onlarla ribonukleotidi fosfodiester bağları vasitəsilə birləşdirərək əmələ gələn bir növ nuklein turşusudur.

RNT-nin tədqiqinin əsas məqsədi çirklənmədən Toplam RNT çıxarmaqdır və RNT çıxarılmasının əsas prinsipi təxminən aşağıdakı kimi ümumiləşdirilə bilər:

1. Əvvəlcə hüceyrələri pozun

2. Sonra makromolekulyar çirkləri (zülallar, lipidlər, DNT və s.) çıxarın.

3. Nəhayət, duzların və üzvi həlledicilərin çıxarılması və RNT-nin daha da təmizlənməsi zamanı RNT çökdürülür.

Ekstraksiya metodunun keçmişi və indisi

RNT çıxarılması metodunun ilk nəsli Piotr Chomczynski adlı baba və nənə Nicoletta Sacchi tərəfindən icad edilmiş TRIzol çökdürmə üsuludur (istifadə olunan reagentlərə guanidin izotiyosiyanat, fenol, xloroform və s. daxildir), çünki bu ixtira RNT-nin çıxarılmasını tez və asan həyata keçirməyə imkan verir, o vaxtdan bəri RNA-nın tədqiqinə başlanmışdır.

Daha sonra baba bu patenti Invitrogenə satdı və Invitrogen bu üsulu dünyaya tanıtdı və geniş istifadə olunan bir üsul oldu.

Daha sonra Invitrogen Thermo tərəfindən alındı!

Nümayəndəlik məhsulu: Invitrogen TRIzol reagenti

Bununla belə, TRIzol çöküntü üsulu RNT-nin çoxlu çökdürülməsini və çıxarılmasını tələb edir və istifadə olunan reagentlər zəhərlidir və işləmək üçün uzun müddət tələb olunur.

Buna görə də, digər çirkləri çıxararkən nümunədə RNT-nin bərpasını maksimum dərəcədə artırmaq üçün xüsusi bir nuklein turşusu adsorbsiya materialı kimi silisium gel membranından istifadə edərək ikinci nəsil sütun-ferment təmizləmə üsulu ortaya çıxdı.

İkinci nəsil metod sabit performans əsasında əməliyyatı sadələşdirir, risk faktorunu azaldır və RNT ekstraksiyasının səmərəliliyini artırır.

Nümayəndə məhsulları: QIAGEN RNeasy və əksər yerli məhsullar

Bununla belə, həm birinci, həm də ikinci nəsil üsullar DNT-nin çirklənməsini aradan qaldırmaq üçün DNaz-ın istifadəsini tələb edir ki, bu da sonrakı aşağı eksperimentlərə bəzi narahatlıqlar gətirir.Qalıq DNase tərs transkripsiyanın effektivliyini azaldacaq və birinci zəncir cDNT sintezini azaldacaq və bununla da nəticələrin düzgünlüyünə təsir edəcək.

Buna görə də üçüncü nəsil çıxarma üsulu ikinci nəsil əsasında optimallaşdırılmışdır.Təcrübə üçün heç bir ferment əlavə etmək lazım deyil və RNT yalnız iki sütunla asanlıqla əldə edilə bilər.

Sütun 1: DNT-ni təmizləmək üçün DNT Təmizləmə Sütunu

Sütun 2: Yalnız RNT sütunu xüsusi olaraq RNT-ni adsorbsiya edir və bərpa edir

Belə sadə əməliyyat nəinki vaxta qənaət edir, həm də aşağı axın eksperimentlərinin işini asanlaşdırır!

Nümayəndəlik məhsulları: QIAGEN RNeasy Plus vəForegeneRNT təmizləmə seriyası məhsulları

(RNeasy Plus)

（ForegeneninBitki Ümumi RNT İzolyasiya Kiti)

Sakitcə deyin!Foregene-nin RNT dəsti, həmçinin insan orqanizminə heç bir zəhərli maddə əlavə etmədən bərk səthdə 400μg RNase-ni 1 dəqiqə ərzində tamamilə silə bilən, istifadəsi çox asan olan RNase Silgini təqdim edir!

Şəkil1: Əməliyyat prosesinin müqayisə diaqramı

Foregene-nin məhsulları RNT-nin çıxarılmasını cəmi iki mahnıda tamamlaya bilər, başqalarını təcrübənizin irəliləyişinə qısqanclıqla yanaşmayın!

Şəkil2:Eeksperimental nəticələr müqayisə diaqramı

Birinci nəsil (1: TRIzol)

İkinci nəsil (2: QIAGEN-in RNeasy)

Üçüncü nəsil (3: QIAGEN-in RNeasy plus, 4: Foregene)

Şəkil3: qPCR qrafiki (gücləndirici əyri qrafiki)

Birinci nəsil (yaşıl TRIzol deməkdir -, qırmızı TRIzol + deməkdir)

İkinci nəsil (göy mavi QIAGEN RNeasy-, qırmızı QIAGEN RNeasy + deməkdir)

Üçüncü nəsil (mavi QIAGEN RNeasy plus, yaşıl isə Foregene deməkdir)

(Qeyd: qPCR qrafiki “-” DNase əlavə edilmədiyini və DNT çirklənməsinin aradan qaldırılmadığını göstərir. Buna görə də KT daha yüksəkdir və nəticə dəqiq deyil; “+” DNazın əlavə edildiyini və DNT çirklənməsinin aradan qaldırıldığını göstərir, nəticə dəqiqdir)

Hər bir texniki təkmilləşdirmə eksperimentin fəaliyyətinin daha sadə və istifadəçi üçün daha əlverişli istiqamətdə inkişaf etməsi deməkdir.

Foregene daha çox elmi tədqiqatçıya eksperimental vaxta və xərclərə qənaət etməyə, yüksək keyfiyyətli eksperimental nəticələr əldə etməyə və birlikdə daha dəyərli elmi tədqiqat nailiyyətləri yaratmağa kömək etmək məqsədi daşıyır.