Problemin Təhlili Bələdçisi

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Aşağı məhsuldarlıq və ya DNT yoxdur

Nümunənin mənbəyi, nümunənin yaşı, nümunənin saxlanma şəraiti və əməliyyat da daxil olmaqla, adətən genomik DNT-nin məhsuldarlığına təsir edən bir çox amillər var.

Ekstraksiya zamanı genomik DNT əldə edilə bilmədi

1. Toxuma nümunələri düzgün olmayan şəkildə saxlanılır və ya çox uzun müddət saxlanılır, nəticədə genomik DNT-nin deqradasiyası baş verir.

Tövsiyə: Toxuma nümunələrini maye azotda və ya -20-də saxlayın°C;genomik DNT hasilatı üçün yeni toplanmış nümunələrdən istifadə etməyə çalışın.

2. Çox az nümunə miqdarı müvafiq genomik DNT-nin çıxarılmasına səbəb ola bilər.

Təklif: Uzun müddət saxlanılan və ya ciddi genomik DNT deqradasiyası olan toxuma nümunələri üçün əhəmiyyətli genomik DNT çıxarmaq üçün toxuma nümunələrinin miqdarı müvafiq şəkildə artırıla bilər.Nümunənin miqdarı DNT ehtiyaclarına görə müəyyən edilə bilər, lakin təzə nümunə 100 mq, quru nümunə isə 30 mq-dan çox olmamalıdır.

3. Nümunə maye azotla üyüdülmür və ya maye azotdan sonra çox uzun müddətə yerləşdirilmir.

Təklif: DNT ekstraksiyası zamanı hüceyrə divarını qırmaq üçün nümunə maye azotla tam üyüdülməlidir;üyüdüldükdən sonra nümunə tozunu 65 dərəcəyə qədər qızdırılan PL1-ə köçürün°C mümkün qədər tez (torpaq tozu əridildikdən sonra genomik DNT sürətlə parçalanmağa başlayacaq) .

4. Foregene Proteazın düzgün saxlanmaması aktivliyin azalması və ya təsirsiz hala gəlməsi ilə nəticələnir.

Tövsiyə: Foregene Proteazın saxlanma şərtlərini təsdiqləyin və ya onu fermentativ hidroliz üçün yeni Foregene Proteaz ilə əvəz edin.

5. Dəst düzgün olmayan şəkildə saxlanılır və ya çox uzun müddət saxlanılır, bu da dəstin bəzi komponentlərinin sıradan çıxmasına səbəb olur.

Tövsiyə: Müvafiq əməliyyatlar üçün yeni bitki genomik DNT ekstraksiya dəsti alın.

6. Kitdən düzgün istifadə edilməməsi.

Təklif: Bitki genomik DNT-nin çıxarılması və təmizlənməsi üçün nümunələrə həsr olunmuş Bitki DNT İzolyasiya Kitini alın.

7. a əlavə etmədən DB-ni bufer edinsusuz etanol.

Tövsiyə: Bufer DB-yə mütləq etanolun düzgün həcmini əlavə etdiyinizə əmin olun.

8. Eluent silisium membranına düzgün damcılmayıb.

Təklif: 65-də əvvəlcədən isidilmiş elüent əlavə edin℃silisium gel membranının ortasına damcılayın və elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün onu otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.

Aşağı məhsuldar genomik DNT əldə etmək üçün ekstraksiya

1. Nümunə düzgün olmayan şəkildə saxlanılır və ya çox uzun müddət saxlanılır, nəticədə genomik DNT-nin deqradasiyası baş verir.

Tövsiyə: Toxuma nümunələrini -20-də saxlayın℃;genomik DNT hasilatı üçün yeni toplanmış toxuma nümunələrindən istifadə etməyə çalışın.

2. Əgər toxuma nümunələrinin miqdarı çox azdırsa, çıxarılan genomik DNT az olacaq.

Təklif: Bəzi bitki nümunələri su ilə zəngindir, məsələn, yosunlar və s.

3. Nümunələr maye azotla yaxşıca üyüdülməmiş və ya üyüdüldükdən sonra çox uzun müddət otaq temperaturunda qalmışdır.

Təklif: Maye azotun üyüdülməsi kifayət qədər olmalıdır və nümunə hüceyrə divarı mümkün qədər qırılmalıdır;üyüdüldükdən dərhal sonra nümunə tozu 65-ə köçürülməlidir℃növbəti addım üçün əvvəlcədən isidilmiş Bufer PL1.

4. Düzgün dəstdən istifadə etməmək.

Tövsiyə: Bitki genomik DNT-sini çıxarmaq və təmizləmək üçün xüsusi Bitki DNT İzolyasiya Kitindən istifadə edin.

5. Foregene Protease-nin düzgün saxlanmaması aktivliyin azalmasına və ya inaktivləşməsinə səbəb olur.

Tövsiyə: Foregene Proteazın saxlanma şərtlərini təsdiqləyin və ya onu fermentativ hidroliz üçün yeni Foregene Proteaz ilə əvəz edin.

6. Eluent problemi

Tövsiyə: Elüsyon üçün Buffer EB istifadə edin;ddH istifadə edirsinizsə₂O və ya digər elüentlər, elüentin pH-nın 7,0-8,5 arasında olduğundan əmin olun.

7. Eluent düzgün damcılmayıb

Təklif: Elüsyonun effektivliyini artırmaq üçün silisium membranının ortasına elüsyon damlasını əlavə edin və otaq temperaturunda 5 dəqiqə buraxın.

8. Eluent həcmi çox kiçikdir

Təklif: Zəhmət olmasa, ən azı 100-dən az olmayan təlimatlara uyğun olaraq genomik DNT elüsyonu üçün elüentdən istifadə edin.μl.

Aşağı təmizliyə malik genomik DNT ekstraktı

Genomik DNT-nin aşağı saflığı aşağı axın təcrübələrinin uğursuzluğuna və ya zəif təsirinə səbəb olacaq, məsələn: fermenti kəsmək mümkün deyil və hədəf gen fraqmenti PCR ilə əldə edilə bilməz.

1. Müxtəlif zülal çirklənməsi, RNT çirklənməsi.

Təhlil: Bufer PW sütunu yumaq üçün istifadə edilməmişdir;Bufer PW sütunu düzgün sentrifuqa sürətində yumaq üçün istifadə edilməmişdir.

Təklif: supernatant sütundan keçərkən, supernatantda yağıntının olmamasına əmin olun;təmizləyici sütunu təlimatlara uyğun olaraq Bufer PW ilə yumağınızdan əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.

2. Çirkli ionların çirklənməsi.

Təhlil: Bufer WB yuma sütunu buraxıldı və ya yalnız bir dəfə yuyuldu, nəticədə qalıq ion çirklənməsi yarandı.

Tövsiyə: Qalıq ionları mümkün qədər çıxarmaq üçün təlimatlara uyğun olaraq Buffer WB ilə iki dəfə yuyulmağınızdan əmin olun.

3. RNaz ilə çirklənmə.

Təhlil: Ekzogen RNase Buferə əlavə edilir;Bufer PW-də səhv yuyulma əməliyyatı qalıq RNase ilə nəticələnəcək və in vitro transkripsiya kimi aşağı axın RNT eksperimental əməliyyatlarına təsir edəcək.

Təklif: Foregene seriyalı nuklein turşusu ekstraksiya dəstləri əlavə RNaz olmadan RNT-ni çıxara bilər və Bitki DNT İzolyasiya Kitindəki bütün reagentlər RNaz-a ehtiyac duymur;təmizləyici sütunu təlimatlara uyğun olaraq Bufer PW ilə yumağınızdan əmin olun və bu addımı atmaq olmaz.

4. Etanol qalıqları.

Təhlil: Təmizləmə sütunu Buffer WB ilə yuyulduqdan sonra heç bir boş boru sentrifuqası aparılmadı.

Tövsiyə: Boş borunun düzgün sentrifuqalanması üçün təlimatlara əməl edin.

Təlimat:

Bitki DNT İzolyasiya Kiti Təlimat Kitabı