Təcrübə işçilərinin davranışını standartlaşdırmaq üçün PCR təcrübəsi SOP-nu qurun.
Təcrübəçi əməliyyat prosedurlarına ciddi şəkildə riayət edir və insan faktorlarının səbəb ola biləcəyi PCR çirklənməsini minimuma endirir və ya çirklənmənin baş verməsinin qarşısını alır.Bundan əlavə, eksperimentator müvafiq avadanlığı idarə etmək, bütün iş prosesini aydınlaşdırmaq, çirklənmənin müalicə üsullarını və laboratoriya keyfiyyətinə nəzarət üsullarını mənimsəmək və sınaq nəticələrini düzgün şərh etmək bacarığı daxil olmaqla, müvafiq peşəkar bilik və bacarıqlara malik olmalıdır.
Standart PCR laboratoriyası yaradın.
PCR laboratoriyası prinsipcə dörd sahəyə bölünür, yəni reagent hazırlama sahəsi, nümunə emal sahəsi, gücləndirmə sahəsi və gücləndirmə məhsulunun təhlili sahəsi.İlk iki sahə pre-amplifikasiya sahələri, son iki sahə isə gücləndirmə sonrası sahələrdir.Əvvəlcədən gücləndirmə zonası və gücləndirmə sonrası zona ciddi şəkildə ayrılmalıdır.Eksperimental materiallar, reagentlər, qeyd kağızı, qələmlər, təmizləyici materiallar və s., yalnız gücləndirmə öncəsi sahədən gücləndirmə sonrası sahəyə, yəni reagent hazırlama sahəsindən → nümunənin emal sahəsindən → gücləndirmə sahəsi → gücləndirici məhsulun təhlili sahəsindən axa bilər və geriyə axmamalıdır.Laboratoriyada hava axını da gücləndirilmədən əvvəlki sahədən gücləndirildikdən sonrakı sahəyə axmalıdır, geriyə axmamalıdır.İdeal PCR laboratoriya dizaynı aşağıda göstərilmişdir:
Şəkil A: Bufer otağında mənfi təzyiqlə ideal PCR laboratoriya quraşdırma rejimi
Şəkil B: Bufer otağında müsbət təzyiqlə ideal PCR laboratoriya quraşdırma rejimi
Şəkil A və Şəkil B-də verilmiş PCR laboratoriyasının quraşdırma diaqramları daha ideal quraşdırma rejimi olmalıdır və şərtləri olan laboratoriya dizayn üçün bu rejimə müraciət edə bilər.Adi laboratoriyalar üçün tövsiyə olunur ki, PZR gücləndirmə sahəsi və məhsulun analiz sahəsi ayrıla bilsin və nümunənin hazırlanması sahəsində və PCR gücləndirmə sahəsində qapağın açılması mümkün qədər azaldılmalıdır.Yadda saxlayın: Məhsulun təhlili sahəsindəki məhsulların və eksperimental ləvazimatların nümunə hazırlama sahəsinə və PCR gücləndirmə sahəsinə aparılması qəti qadağandır.
Laboratoriya yalnız PCR aşkarlama və identifikasiyanı həyata keçirirsə, adi PCR əvəzinə flüoresan kəmiyyət PCR istifadə etmək tövsiyə olunur.
Floresan kəmiyyət PCR aşkarlama nəticələri flüoresan siqnalları ilə toplana və təhlil edilə bilər, buna görə də reaksiyadan sonra elektroforez üçün qapağı açmağa ehtiyac yoxdur, bu da aerozolların əmələ gəlməsi üçün reaksiya məhsullarının sızması nəticəsində yaranan PCR məhsulunun çirklənməsinin qarşısını alır.Gel elektroforezinin yükləmə mərhələsi zamanı qapaq açılışlarının sayını artırsanız, aerozol çirklənməsi ehtimalı var.Kəmiyyət PCR-nin tətbiqini təşviq etmək və tədricən keyfiyyət PCR-ni əvəz etmək tövsiyə olunur.
PCR reaksiyası üçün UNG anti-PCR məhsulunun çirklənmə sistemi istifadə olunur.
Sistem dTTP əvəzinə dUTP istifadə edir.PCR reaksiyasından sonra bütün PCR məhsulları (DNT fraqmentləri) dUTP ilə birləşdirilir;PCR reaksiyasının növbəti raundunda sistemə əlavə edilən UNG fermenti PCR-dən əvvəl 5 dəqiqə ərzində 37°C-də inkubasiya edilir ki, bu da xüsusi olaraq dUTP olan bütün DNT fraqmentlərini deqradasiya edə bilər və sonra PCR reaksiyasını həyata keçirə bilər.Bu, PCR məhsullarının səbəb olduğu aerozol çirklənməsini tamamilə aradan qaldıra bilər.Effekt aşağıdakı şəkildə göstərilmişdir:
Qeyd: Birbaşa PCR seriyası üçün Foregene-nin anti-PCR məhsulunun çirklənmə sisteminin seriya məhsullarını seçə bilərsiniz.Təklif
Geniş miqyaslı genotipləşdirmə sınaqlarını aparan laboratoriyalar üçün ağlabatan laboratoriyaların tikintisi ilə yanaşı, reagentləri sınaqdan keçirmək üçün UNG anti-PCR məhsulunun çirklənmə sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur.
Xatırlatma: Bu sistemin istifadəsi artıq səbəb olmuş PCR məhsulunun çirklənməsini aradan qaldıra bilməz.Buna görə də, müvafiq testin əvvəlində UNG sistemi istifadə edilməlidir və PCR məhsullarının çirklənməsinin qarşısını almaq üçün UNG sistemi PZR gücləndirilməsi üçün istifadə edilməlidir.
Genişmiqyaslı testlər apararkən Foregene-nin Direct PCR-UNG sistemindən istifadə etmək tövsiyə olunur, məsələn:
Bitki yarpağı birbaşa PCR dəsti-UNG；
Bitki Toxumu Birbaşa PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Bu Foregene dəstləri seriyasıyalnız PCR aşkarlamasını tez və geniş miqyasda həyata keçirə bilməz, həm də PZR məhsulunun çirklənməsinin qarşısının alınması və idarə olunmasının effektiv şəkildə həyata keçirilməsinə imkan verir.
Göndərmə vaxtı: 19 mart 2021-ci il
